| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 符号与缩略语说明 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-31页 |
| 1 淀粉的研究进展 | 第15-20页 |
| 1.1 淀粉概述 | 第15-16页 |
| 1.2 淀粉与营养 | 第16-20页 |
| 2 异淀粉酶的研究进展 | 第20-24页 |
| 2.1 异淀粉酶简介 | 第20-22页 |
| 2.2 异淀粉酶的分子机制 | 第22-23页 |
| 2.3 异淀粉酶的应用 | 第23-24页 |
| 3 毕赤酵母表达系统概述 | 第24-31页 |
| 3.1 毕赤酵母概述 | 第24-25页 |
| 3.2 毕赤酵母表达系统概述 | 第25-31页 |
| 第二章 重组异淀粉酶IsoM的酶学性质与作用方式的研究 | 第31-57页 |
| 第一节 异淀粉酶的鉴定与表达 | 第31-43页 |
| 1 材料与方法 | 第31-33页 |
| 1.1 菌种与质粒 | 第31页 |
| 1.2 主要试剂 | 第31-32页 |
| 1.3 主要仪器 | 第32页 |
| 1.4 主要培养基与溶液 | 第32-33页 |
| 2 实验方法 | 第33-39页 |
| 2.1 EGB发酵液制备 | 第33页 |
| 2.2 酶活测定 | 第33页 |
| 2.3 蛋白含量测定 | 第33-34页 |
| 2.4 目的蛋白纯化 | 第34页 |
| 2.5 SDS-PAGE电泳分析及肽指纹图谱鉴定 | 第34页 |
| 2.6 EGB的基因组的提取 | 第34-35页 |
| 2.7 isoM全长扩增,纯化及表达载体构建 | 第35-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-43页 |
| 3.1 淀粉酶的分离纯化 | 第39-40页 |
| 3.2 异淀粉酶的基因扩增与序列分析 | 第40-42页 |
| 3.3 表达载体构建与线性化 | 第42-43页 |
| 3.4 验证转化后阳性转化子 | 第43页 |
| 第二节 异淀粉酶的酶学性质研究 | 第43-54页 |
| 1 材料与方法 | 第43-44页 |
| 1.1 菌株与试剂 | 第43页 |
| 1.2 常用溶液与培养基 | 第43-44页 |
| 1.3 仪器与设备 | 第44页 |
| 2 实验方法 | 第44-47页 |
| 2.1 重组酶rIsoM的表达与纯化 | 第44-45页 |
| 2.2 重组酶rIsoM的SDS-PAGE电泳分析及酶谱分析 | 第45页 |
| 2.3 重组酶rIsoM的活性测定方法与酶活定义 | 第45页 |
| 2.4 重组酶rIsoM的酶学特性研究 | 第45-46页 |
| 2.5 重组酶rIsoM的动力学而特性研究 | 第46页 |
| 2.6 重组酶rIsoM的水解产物分析 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-54页 |
| 3.1 重组酶rIsoM的诱导表达 | 第47-49页 |
| 3.2 pH和温度对重组酶rIsoM的影响 | 第49-50页 |
| 3.3 金属离子与有机试剂对重组酶rIsoM的影响 | 第50页 |
| 3.4 重组酶rIsoM的动力学参数 | 第50-51页 |
| 3.5 重组酶rIsoM的底物特异性 | 第51-52页 |
| 3.6 重组酶rIsoM对淀粉的水解产物分析 | 第52-54页 |
| 本章讨论 | 第54-55页 |
| 本章小结 | 第55-57页 |
| 第三章 异淀粉酶IsoM的高效表达 | 第57-79页 |
| 第一节 表达菌株的发酵条件优化 | 第57-62页 |
| 1. 材料与方法 | 第57-59页 |
| 1.1 菌株、试剂与设备 | 第57-58页 |
| 1.2 发酵指标的测定 | 第58页 |
| 1.3 单因素培养条件对产酶量的影响 | 第58-59页 |
| 1.4 正交实验设计因素水平 | 第59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-62页 |
| 2.1 培养条件对酶的影响 | 第59-61页 |
| 2.2 正交试验设计因素水平 | 第61-62页 |
| 第二节 高效表达菌株的构建 | 第62-74页 |
| 1 材料与方法 | 第62-67页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第62页 |
| 1.2 培养基与常用试剂 | 第62页 |
| 1.3 仪器与设备 | 第62-63页 |
| 1.4 pGAPGZαA载体构建 | 第63页 |
| 1.5 多个表达载体构建与验证 | 第63-64页 |
| 1.6 分子伴侣表达载体构建与验证 | 第64-65页 |
| 1.7 多种表达载体菌株构建 | 第65-67页 |
| 1.8 多种表达菌株的诱导发酵 | 第67页 |
| 1.9 测活方法 | 第67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-74页 |
| 2.1 表达载体的构建 | 第67-69页 |
| 2.2 表达菌株的构建 | 第69-71页 |
| 2.3 表达菌株的产酶能力 | 第71-74页 |
| 本章讨论 | 第74-77页 |
| 本章小结 | 第77-79页 |
| 第四章 IsoM应用于淀粉加工领域的初步探究 | 第79-89页 |
| 第一节 IsoM与α-1,4-淀粉酶AmyM共转化淀粉制备麦芽寡糖 | 第79-81页 |
| 1 材料与方法 | 第79-80页 |
| 1.1 菌株与培养基 | 第79页 |
| 1.2 设备与仪器 | 第79-80页 |
| 1.3 常用试剂 | 第80页 |
| 1.4 发酵液制备 | 第80页 |
| 1.5 重组酶IsoM与AmyM对麦芽六糖的制备 | 第80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-81页 |
| 第二节 IsoM应用于慢消化淀粉与抗性淀粉的制备 | 第81-86页 |
| 1 材料与方法 | 第81-83页 |
| 1.1 菌株 | 第81页 |
| 1.2 试剂与培养基 | 第81-82页 |
| 1.3 设备与仪器 | 第82页 |
| 1.4 脱支度的确定 | 第82页 |
| 1.5 端基碳构型的确定 | 第82页 |
| 1.6 慢消化淀粉与抗性淀粉制备 | 第82-83页 |
| 1.7 IsoM处理后的淀粉颗粒形态观察 | 第83页 |
| 2 结果与分析 | 第83-86页 |
| 2.1 脱支度的确定 | 第83-85页 |
| 2.2 慢消化淀粉与抗性淀粉制备 | 第85页 |
| 2.3 IsoM处理后淀粉颗粒形态观察 | 第85-86页 |
| 本章讨论 | 第86-87页 |
| 本章小结 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-99页 |
| 全文总结 | 第99-101页 |
| 主要创新点 | 第101-103页 |
| 下一步工作设想 | 第103-105页 |
| 附录 | 第105-113页 |
| 附录1 相关试剂 | 第105-106页 |
| 附录2 仪器与设备 | 第106-107页 |
| 附录3 相关核酸和氨基酸序列 | 第107-113页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第113-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
