| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-20页 |
| 1. 家蚕杆状病毒基因研究现状简介 | 第13-15页 |
| 1.1 家蚕杆状病毒基因研究概况 | 第13页 |
| 1.2 家蚕杆状病毒凋亡抑制基因及其机制研究现状 | 第13-14页 |
| 1.3 家蚕杆状病毒基因表达时相研究概况 | 第14-15页 |
| 2. 家蚕杆状病毒相关基因研究现状 | 第15-18页 |
| 2.1 lef-6研究现状 | 第15-16页 |
| 2.2 bro-d研究现状 | 第16-17页 |
| 2.3 lef-5研究现状 | 第17页 |
| 2.4 odv家族基因研究现状 | 第17-18页 |
| 2.5 alk-exo研究现状 | 第18页 |
| 3. 酵母单杂交系统简介 | 第18-20页 |
| 3.1 酵母单杂交原理和方法 | 第18-19页 |
| 3.2 酵母单杂交优点及应用 | 第19-20页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第20-22页 |
| 1. 研究目的与意义 | 第20页 |
| 2. 研究主要内容 | 第20-21页 |
| 3. 实验流程图 | 第21-22页 |
| 第三章 BmNPV iap2基因启动子结合蛋白的筛选 | 第22-36页 |
| 1. 材料和试剂 | 第22页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 1.2 试剂及技术支持 | 第22页 |
| 2. 实验方法 | 第22-31页 |
| 2.1 构建诱饵基因表达载体piap2130-AbAi | 第22-24页 |
| 2.1.1 iap2130片段的合成 | 第22-23页 |
| 2.1.2 piap2130-AbAi载体的构建 | 第23-24页 |
| 2.2 重组质粒piap2130-AbAi导入酵母菌基因组 | 第24-26页 |
| 2.2.1 重组质粒piap2130-AbAi线性化 | 第24-25页 |
| 2.2.2 酵母感受态的制备 | 第25页 |
| 2.2.3 转化酵母菌感受态 | 第25-26页 |
| 2.2.4 酵母诱饵基因PCR鉴定 | 第26页 |
| 2.3 抑制酵母自激活作用抗生素浓度测定 | 第26-27页 |
| 2.4 cDNA文库构建 | 第27-30页 |
| 2.4.1 BmNPV感染BmN后总RNA的提取 | 第27页 |
| 2.4.2 纯化及浓缩mRNA | 第27-28页 |
| 2.4.3 合成cDNA第一链 | 第28-29页 |
| 2.4.4 用LD(long distance)-PCR合成双链cDNA及纯化 | 第29-30页 |
| 2.5 cDNA文库转化含有诱饵基因酵母菌 | 第30-31页 |
| 2.5.1 酵母菌Y1HGold-piap2130-AbAi感受态制备 | 第30页 |
| 2.5.2 转化酵母菌Y1HGold-piap2130-AbAi | 第30页 |
| 2.5.3 阳性克隆鉴定 | 第30-31页 |
| 3. 结果与分析 | 第31-34页 |
| 3.1 诱饵基因iap2130片段合成鉴定 | 第31-32页 |
| 3.2 质粒piap2130-AbAi PCR鉴定和双酶切鉴定 | 第32页 |
| 3.3 酵母诱饵基因PCR结果鉴定 | 第32-33页 |
| 3.4 抑制酵母自激活作用抗生素浓度 | 第33页 |
| 3.5 酵母单杂交筛选系统cDNA文库构建鉴定 | 第33页 |
| 3.6 iap2130互作蛋白及其编码基因 | 第33-34页 |
| 4. 讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 bro-d对病毒复制转录及细胞凋亡的影响 | 第36-53页 |
| 1. 材料与试剂 | 第36页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第36页 |
| 1.2 试剂和技术支持 | 第36页 |
| 2. 方法 | 第36-45页 |
| 2.1 bro-d缺失型病毒bro-d-ko-Bacmid构建 | 第36-39页 |
| 2.1.1 BmNPV线性化bro-d基因打靶片段的制备 | 第36页 |
| 2.1.2 大肠杆菌DH10Bac(不含pKD46)感受态制备 | 第36-37页 |
| 2.1.3 DH10Bac (pKD46)感受态制备 | 第37页 |
| 2.1.4 bro-d基因打靶片段转化DH10Bac (pKD46)感受态及鉴定 | 第37-39页 |
| 2.2 bro-d缺失后BmNPV基因组复制水平的分析 | 第39-40页 |
| 2.2.1 转染后细胞内总DNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.2.2 gp41含量标准曲线的qRT-PCR测绘 | 第40页 |
| 2.2.3 各细胞样总DNA中的gp41含量的qRT-PCR分析 | 第40页 |
| 2.3 bro-d缺失后BmNPV基因组转录水平的分析 | 第40-41页 |
| 2.3.1 转染后细胞总RNA的提取和消化 | 第40-41页 |
| 2.3.2 总RNA逆转录为cDNA | 第41页 |
| 2.3.3 各细胞样总RNA中各基因含量的qRT-PCR分析 | 第41页 |
| 2.4 pIEx-1-bro-d瞬时表达载体的构建 | 第41-43页 |
| 2.5 bro-d缺失后细胞凋亡相关分析 | 第43-45页 |
| 2.5.1 bro-d缺失对iap2转录水平的影响 | 第43页 |
| 2.5.2 bro-d缺失后细胞活力变化的MTT分析 | 第43页 |
| 2.5.3 bro-d缺失后细胞凋亡相关因子的Western blot分析 | 第43-45页 |
| 3. 结果与分析 | 第45-51页 |
| 3.1 bro-d线性化打靶片段制备结果鉴定 | 第45页 |
| 3.2 bro-d缺失型病毒bro-d-ko-Bacmid构建的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3 复制指数标准曲线 | 第46-47页 |
| 3.4 bro-d缺失对BmNPV基因组复制的影响 | 第47-48页 |
| 3.5 bro-d缺失对BmNPV基因组转录的影响 | 第48页 |
| 3.6 pIEx-1-bro-d质粒构建鉴定 | 第48-49页 |
| 3.7 bro-d缺失后细胞凋亡相关分析 | 第49-51页 |
| 3.7.1 bro-d缺失对iap2转录水平影响 | 第49页 |
| 3.7.2 bro-d缺失后细胞活力变化的MTT分析 | 第49-50页 |
| 3.7.3 bro-d缺失后细胞凋亡相关因子的Western blot分析 | 第50-51页 |
| 4. 讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 lef-6对病毒复制转录影响及抑制细胞凋亡功能研究 | 第53-63页 |
| 1. 材料与试剂 | 第53页 |
| 2. 方法 | 第53-56页 |
| 2.1 lef-6缺失型病毒lef-6-ko-Bacmid构建 | 第53-54页 |
| 2.1.1 BmNPV线性化lef-6基因打靶片段的制备 | 第53页 |
| 2.1.2 大肠杆菌DH10Bac(不含pKD46)感受态制备 | 第53页 |
| 2.1.3 DH10Bac (pKD46)感受态制备 | 第53页 |
| 2.1.4 lef-6基因打靶片段转化DH10Bac (pKD46)感受态及鉴定 | 第53-54页 |
| 2.2 lef-6缺失后BmNPV基因组复制水平的分析 | 第54页 |
| 2.2.1 转染后细胞总DNA的提取 | 第54页 |
| 2.2.2 gp41含量标准曲线的qRT-PCR测绘 | 第54页 |
| 2.2.3 各细胞样总DNA中的gp41含量的qRT-PCR分析 | 第54页 |
| 2.3 lef-6缺失后BmNPV基因组转录水平的分析 | 第54-55页 |
| 2.3.1 转染后细胞总RNA的提取和消化 | 第54页 |
| 2.3.2 总RNA逆转录为cDNA | 第54页 |
| 2.3.3 各细胞样总RNA中各基因含量的qRT-PCR分析 | 第54-55页 |
| 2.4 pIEx-1-lef-6瞬时表达载体的构建 | 第55页 |
| 2.5 lef-6缺失后细胞凋亡分析 | 第55-56页 |
| 2.5.1 lef-6缺失对iap2转录水平的qRT-PCR分析 | 第55页 |
| 2.5.2 lef-6缺失后细胞活力的MTT分析 | 第55页 |
| 2.5.3 lef-6缺失后细胞凋亡相关因子的Western blot分析 | 第55-56页 |
| 3. 结果与分析 | 第56-61页 |
| 3.1 lef-6线性化打靶片段的制备 | 第56页 |
| 3.2 lef-6缺失型病毒lef-6-ko-Bacmid构建的鉴定 | 第56-57页 |
| 3.3 lef-6缺失后BmNPV基因组复制的影响 | 第57-58页 |
| 3.4 lef-6缺失对BmNPV基因组转录的影响 | 第58页 |
| 3.5 pIEx-1-lef-6质粒构建鉴定 | 第58-59页 |
| 3.6 lef-6缺失后细胞凋亡的分析 | 第59-61页 |
| 3.6.1 lef-6缺失对iap2转录水平的影响 | 第59页 |
| 3.6.2 lef-6缺失后细胞活力的MTT分析 | 第59-60页 |
| 3.6.3 lef-6缺失后细胞凋亡相关因子的Western blot分析 | 第60-61页 |
| 4. 讨论 | 第61-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
