| 摘要 | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-18页 |
| 1.1 微藻的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.1.1 微藻特性与应用 | 第11页 |
| 1.1.2 盐藻特性与应用 | 第11-12页 |
| 1.2 微藻基因工程研究 | 第12-13页 |
| 1.2.1 原核微藻基因工程 | 第12页 |
| 1.2.2 真核微藻基因工程 | 第12-13页 |
| 1.3 微藻遗传转化方法 | 第13-15页 |
| 1.3.1 基因枪法 | 第13页 |
| 1.3.2 聚乙二醇法 | 第13-14页 |
| 1.3.3 电穿孔法 | 第14页 |
| 1.3.4 农杆菌介导法 | 第14页 |
| 1.3.5 玻璃珠转化法 | 第14页 |
| 1.3.6 碳化硅细丝转化法 | 第14-15页 |
| 1.4 盐藻及微藻油脂合成代谢的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第16-17页 |
| 1.6 技术路线 | 第17-18页 |
| 第二章 杜氏盐藻藻种鉴定及无菌体系的建立 | 第18-29页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.2.1 藻种 | 第18页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-22页 |
| 2.3.1 藻种培养及纯化 | 第19-20页 |
| 2.3.2 藻种的鉴定 | 第20-21页 |
| 2.3.3 六种抗生素的除菌试验 | 第21页 |
| 2.3.4 盐藻细胞对氯霉素、氨苄青霉素和头孢霉素的敏感性测定 | 第21页 |
| 2.3.5 纸片扩散法检测盐藻藻液中细菌对六种抗生素的敏感性 | 第21页 |
| 2.3.6 纸片扩散法联合抑菌试验 | 第21页 |
| 2.3.7 盐藻藻液多次除菌试验 | 第21-22页 |
| 2.4 结果与分析 | 第22-28页 |
| 2.4.1 从运城盐湖藻样中分离纯化获得一株杜氏盐藻新株系 | 第22-23页 |
| 2.4.2 六种抗生素对盐藻藻液的除菌效果 | 第23-25页 |
| 2.4.3 杜氏盐藻细胞对抗生素的耐受性 | 第25-26页 |
| 2.4.4 盐藻培养液中细菌对抗生素的敏感性 | 第26-27页 |
| 2.4.5 抗生素联合抑菌的试验效果 | 第27-28页 |
| 2.4.6 氯霉素、氨苄青霉素和头孢霉素对盐藻藻液的多次除菌效果 | 第28页 |
| 2.5 讨论与结论 | 第28-29页 |
| 第三章 杜氏盐藻电击转化体系的建立及优化 | 第29-40页 |
| 3.1 引言 | 第29页 |
| 3.2 实验材料 | 第29-30页 |
| 3.2.1 藻种和质粒载体 | 第29-30页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第30页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第30页 |
| 3.3 实验方法 | 第30-32页 |
| 3.3.1 杜氏盐藻生长曲线的绘制 | 第30页 |
| 3.3.2 盐藻对除草剂草铵膦的敏感性试验 | 第30-31页 |
| 3.3.3 盐藻电击转化体系的建立及优化 | 第31-32页 |
| 3.3.4 草铵膦抗性转化藻株的分子鉴定 | 第32页 |
| 3.4 结果与分析 | 第32-39页 |
| 3.4.1 绘制盐藻生长曲线 | 第32-33页 |
| 3.4.2 筛选阳性转化株的最适草铵膦浓度 | 第33-35页 |
| 3.4.3 电击法各转化参数的优化 | 第35-38页 |
| 3.4.4 草铵膦抗性转化株的分子鉴定 | 第38-39页 |
| 3.5 讨论与结论 | 第39-40页 |
| 第四章 CrGPAT超表达载体的构建 | 第40-50页 |
| 4.1 引言 | 第40页 |
| 4.2 实验材料 | 第40-42页 |
| 4.2.1 实验菌株、载体及引物 | 第40-41页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第41页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第41-42页 |
| 4.3 CrGPAT-pCAMBIA3301表达载体的构建 | 第42-46页 |
| 4.3.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 4.3.2 质粒转化并筛选阳性克隆 | 第42-43页 |
| 4.3.3 菌液扩繁及质粒提取 | 第43-44页 |
| 4.3.4 质粒的纯化回收 | 第44页 |
| 4.3.5 质粒双酶切并回收目的片段 | 第44-45页 |
| 4.3.6 连接目的基因和表达载体 | 第45页 |
| 4.3.7 转化酶连产物并鉴定 | 第45页 |
| 4.3.8 提取重组质粒CrGPAT-pCAMBIA3301 | 第45页 |
| 4.3.9 载体鉴定 | 第45-46页 |
| 4.4 结果与分析 | 第46-48页 |
| 4.4.1 鉴定载体CrGPAT-PJET1.2和pCAMBIA3301的阳性克隆 | 第46-47页 |
| 4.4.2 CrGPAT-pCAMBIA3301表达载体的双酶切鉴定 | 第47-48页 |
| 4.5 讨论与结论 | 第48-50页 |
| 第五章 杜氏盐藻基因枪转化体系的建立及优化 | 第50-57页 |
| 5.1 引言 | 第50页 |
| 5.2 实验材料 | 第50-51页 |
| 5.2.1 藻种和质粒载体 | 第50页 |
| 5.2.2 实验仪器和材料 | 第50页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第50-51页 |
| 5.3 实验方法 | 第51-53页 |
| 5.3.1 试验材料准备 | 第51页 |
| 5.3.2 基因枪转化盐藻细胞 | 第51-52页 |
| 5.3.3 筛选阳性转化藻细胞 | 第52页 |
| 5.3.4 最佳转化参数的确定 | 第52页 |
| 5.3.5 草铵膦抗性转化藻株的GUS染色观察 | 第52页 |
| 5.3.6 草铵膦抗性转化藻株的分子鉴定 | 第52-53页 |
| 5.4 结果与分析 | 第53-56页 |
| 5.4.1 基因枪法各转化参数的优化 | 第53-54页 |
| 5.4.2 草铵膦抗性转化株的GUS检测 | 第54页 |
| 5.4.3 草铵膦抗性转化株的分子鉴定 | 第54-56页 |
| 5.5 讨论与结论 | 第56-57页 |
| 第六章 超表达VgDGAT1a和CrGPAT基因杜氏盐藻的表型鉴定 | 第57-63页 |
| 6.1 引言 | 第57页 |
| 6.2 实验材料 | 第57页 |
| 6.2.1 藻种 | 第57页 |
| 6.2.2 实验仪器 | 第57页 |
| 6.2.3 主要试剂 | 第57页 |
| 6.3 实验方法 | 第57-59页 |
| 6.3.1 转基因盐藻生物量的测定 | 第57-58页 |
| 6.3.2 转基因盐藻细胞内总脂含量的测定 | 第58页 |
| 6.3.3 转基因盐藻细胞内蛋白含量的测定 | 第58-59页 |
| 6.3.4 转基因盐藻细胞内类胡萝卜素含量的测定 | 第59页 |
| 6.4 结果分析 | 第59-62页 |
| 6.4.1 转基因盐藻生物量的测定 | 第59-60页 |
| 6.4.2 转基因盐藻细胞内总脂含量的测定 | 第60页 |
| 6.4.3 转基因盐藻细胞内蛋白含量的测定 | 第60-61页 |
| 6.4.4 转基因盐藻细胞内类胡萝卜素含量的测定 | 第61-62页 |
| 6.5 讨论与结论 | 第62-63页 |
| 全文结论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| Abstract | 第71-72页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
