| 中文摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 缩写词 | 第8-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-41页 |
| 1.1 胆管癌 | 第18-19页 |
| 1.1.1 胆管癌的流行病学特征 | 第18页 |
| 1.1.2 胆管癌的分类 | 第18页 |
| 1.1.3 胆管癌的致病因素 | 第18-19页 |
| 1.2 基于HER2的胆警癌靶向治疗 | 第19-23页 |
| 1.2.1 HER2的结构 | 第19-20页 |
| 1.2.2 HER2信号通路 | 第20-21页 |
| 1.2.3 HER2在胆管癌中过表达 | 第21-23页 |
| 1.3 Affibody | 第23-24页 |
| 1.4 脂质体作为纳米载体在疾病诊疗中的应用 | 第24-37页 |
| 1.4.1 脂质体的结构和特点 | 第25页 |
| 1.4.2 脂质体表面修饰 | 第25-27页 |
| 1.4.3 脂质体的被动靶向和主动靶向 | 第27-30页 |
| 1.4.4 脂质体在疾病诊断中的应用 | 第30-34页 |
| 1.4.4.1 脂质体作为显影剂的纳米载体 | 第31-33页 |
| 1.4.4.2 脂质体作为检测生物分子靶标的纳米载体 | 第33-34页 |
| 1.4.5 脂质体在疾病治疗中的应用 | 第34-37页 |
| 1.4.5.1 递送小分子药物治疗 | 第34-35页 |
| 1.4.5.2 基因治疗 | 第35-36页 |
| 1.4.5.3 免疫治疗 | 第36-37页 |
| 1.5 光热治疗 | 第37-39页 |
| 1.5.1 无机材料在光热治疗中的应用 | 第37-38页 |
| 1.5.2 有机材料在光热治疗中的应用 | 第38-39页 |
| 1.6 本论文的研究思路、目标和意义 | 第39-41页 |
| 第二章 材料和实验方法 | 第41-56页 |
| 1. 实验仪器 | 第41页 |
| 2. 实验材料 | 第41-45页 |
| 2.1 菌株、质粒、细胞株和实验动物 | 第41-42页 |
| 2.1.1 大肠杆菌菌株 | 第41页 |
| 2.1.2 质粒 | 第41-42页 |
| 2.1.3 细胞株 | 第42页 |
| 2.1.4 实验动物 | 第42页 |
| 2.2 常用实验试剂 | 第42页 |
| 2.3 常用溶液、试剂以及培养基的配制 | 第42-45页 |
| 2.3.1 培养基及抗生素的配制 | 第42-43页 |
| 2.3.2 细胞实验相关试剂的配制 | 第43页 |
| 2.3.3 碱裂解法质粒提取试剂 | 第43-44页 |
| 2.3.4 核酸电泳及蛋白凝胶电泳的相关试剂 | 第44页 |
| 2.3.5 蛋白免疫印迹实验(Western Blot)相关试剂 | 第44-45页 |
| 2.4 软件 | 第45页 |
| 3. 实验方法 | 第45-56页 |
| 3.1 分子克隆相关实验 | 第45-49页 |
| 3.1.1 感受态大肠杆菌的制备 | 第45-46页 |
| 3.1.2 PCR反应 | 第46页 |
| 3.1.3 PCR产物的胶回收以及酶切反应 | 第46-47页 |
| 3.1.4 PCR产物的连接反应 | 第47-48页 |
| 3.1.5 质粒转化 | 第48页 |
| 3.1.6 质粒的小量提取(碱裂解法) | 第48-49页 |
| 3.2 细胞实验 | 第49-50页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第49页 |
| 3.2.2 细胞传代 | 第49页 |
| 3.2.3 细胞复苏 | 第49-50页 |
| 3.2.4 细胞冻存 | 第50页 |
| 3.2.5 目的质粒细胞转染 | 第50页 |
| 3.3 蛋白质相关实验及方法 | 第50-52页 |
| 3.3.1 蛋白样品的制备及浓度测定(BCA法) | 第50-51页 |
| 3.3.2 蛋白免疫印迹 | 第51-52页 |
| 3.4 鉴定重组蛋白的表达 | 第52页 |
| 3.5 展示Affibody融合蛋白纳米囊泡的制备与纯化 | 第52-53页 |
| 3.6 纳米囊泡的材料学表征与鉴定 | 第53页 |
| 3.6.1 透射电镜观察纳米囊泡的形态 | 第53页 |
| 3.6.2 动态光散射(DLS)测纳米囊泡的粒径大小 | 第53页 |
| 3.7 GENVs-Affibody体外对胆管癌细胞的靶向验证 | 第53页 |
| 3.8 GENVs-Affibody的光热细胞毒性测定 | 第53-55页 |
| 3.8.1 ICG标准曲线的绘制和囊泡装载ICG含量的测定 | 第53-54页 |
| 3.8.2 MTT试验 | 第54页 |
| 3.8.3 Calcein AM/PI染色试验 | 第54-55页 |
| 3.9 裸鼠成瘤试验 | 第55页 |
| 3.10 体内靶向功能的验证 | 第55页 |
| 3.11 肿瘤光热治疗 | 第55-56页 |
| 第三章 结果与分析 | 第56-77页 |
| 1 展示Affibody的纳米囊泡的制备与表征 | 第56-63页 |
| 1.1 表达重组蛋白的载体构建 | 第56-58页 |
| 1.2 外源表达Affibody-GFP融合蛋白并确定其细胞内的定位 | 第58-60页 |
| 1.3 展示Affibody的纳米囊泡的材料学表征 | 第60-62页 |
| 1.4 展示Affibody融合蛋白的纳米囊泡的鉴定 | 第62-63页 |
| 2 GENVs-Affibody体外对胆管癌细胞的靶向验证和光热毒性研究 | 第63-68页 |
| 2.1 胆管癌细胞系HER2的表达情况 | 第63-64页 |
| 2.2 GENVs-Affibody体外对胆管癌细胞的靶向验证 | 第64-65页 |
| 2.3 体外光热毒性研究 | 第65-68页 |
| 3 体内活体靶向成像 | 第68-72页 |
| 3.1 体内靶向功能的验证 | 第68-70页 |
| 3.2 体内生物分布 | 第70-72页 |
| 4 胆管癌光热治疗 | 第72-77页 |
| 4.1 热成像试验 | 第72-73页 |
| 4.2 胆管癌光热治疗试验 | 第73-75页 |
| 4.3 体内毒性测试 | 第75-77页 |
| 第四章 讨论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
