| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第11-24页 |
| 1.1 盐碱地的形成与现状 | 第11页 |
| 1.2 盐碱地的改良措施 | 第11-14页 |
| 1.2.1 物理改良措施 | 第12页 |
| 1.2.2 化学改良措施 | 第12-13页 |
| 1.2.3 生物改良措施 | 第13-14页 |
| 1.3 耐盐水稻培育的现状 | 第14-16页 |
| 1.3.1 耐盐水稻培育的意义 | 第14页 |
| 1.3.2 常规育种法培育耐盐水稻的现状 | 第14页 |
| 1.3.3 利用基因工程技术培育耐盐水稻的现状与意义 | 第14-16页 |
| 1.4 多基因转化载体的研究与应用 | 第16-21页 |
| 1.4.1 脉冲场电泳的工作原理 | 第16页 |
| 1.4.2 多基因载体的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.4.3 BAC载体的应用进展 | 第18页 |
| 1.4.4 BIBAC载体的产生与应用 | 第18-21页 |
| 1.5 高分子量DNA的制备 | 第21页 |
| 1.6 遗传转化 | 第21-22页 |
| 1.7 实验的目的与意义 | 第22页 |
| 1.8 实验技术路线 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-34页 |
| 2.1 实验样品与实验菌株 | 第24页 |
| 2.2 实验仪器 | 第24页 |
| 2.3 主要药品、试剂 | 第24-25页 |
| 2.4 实验方法 | 第25-34页 |
| 2.4.1 BIBAC载体的制备 | 第25-27页 |
| 2.4.2 载体质粒的酶切 | 第27页 |
| 2.4.3 载体脱磷、纯化及检测 | 第27-28页 |
| 2.4.4 载体自连、分离与回收 | 第28页 |
| 2.4.5 合适片段大小DNA的制备 | 第28-31页 |
| 2.4.6 构建载体合适大小DNA片段的获得 | 第31-32页 |
| 2.4.7 BIBAC大片段载体的构建 | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-49页 |
| 3.1 BIBAC-S载体的制备 | 第34-37页 |
| 3.1.1 BIABC载体的提取 | 第34页 |
| 3.1.2 BIBAC载体的酶切 | 第34-35页 |
| 3.1.3 酶切后BIBAC载体的脱磷、电泳分离 | 第35-36页 |
| 3.1.4 BIBAC-S载体的自连、分离与回收 | 第36页 |
| 3.1.5 BIABC-S载体电洗脱、检测 | 第36-37页 |
| 3.2 目的大片段DNA的制备、预酶切 | 第37-43页 |
| 3.2.1 HMW-DNA制备方法比较 | 第37-39页 |
| 3.2.2 改良包埋块法制备芦苇HMW-DNA | 第39-40页 |
| 3.2.3 包埋块的消化、检测 | 第40-41页 |
| 3.2.4 芦苇成熟叶片HMW-DNA的酶切条件 | 第41-43页 |
| 3.3 改进包埋块法制备HMW-DNA的普适性验证----以木榄成熟叶片为材料 | 第43-45页 |
| 3.3.1 四种方法分离木榄细胞核和制备包埋块 | 第43-44页 |
| 3.3.2 木榄细胞核的蛋白酶K消化 | 第44-45页 |
| 3.3.3 改进包埋法细胞核DNA的酶切 | 第45页 |
| 3.4 芦苇HMW-DNA的酶切与目的片段筛选 | 第45-47页 |
| 3.4.1 第一次筛选大片段DNA | 第45-46页 |
| 3.4.2 第二次筛选大片段DNA | 第46-47页 |
| 3.4.3 目的大片段电洗脱 | 第47页 |
| 3.5 芦苇大片段DNA-BIBAC连接转化 | 第47-48页 |
| 3.6 BIBAC插入片段大小检测 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| 4.1 大片段转化载体的构建对于耐盐作物育种的意义 | 第49页 |
| 4.2 以成熟叶片为材料制备高质量HMW-DNA是技术上的突破 | 第49-50页 |
| 4.3 高转化率载体的制备对连接转化的效率至关重要 | 第50-51页 |
| 4.4 脉冲场凝胶电泳仪的参数设置是获得目的片段的关键 | 第51-52页 |
| 5 结论与创新点 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-64页 |
| 附录 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
