| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第13-20页 |
| 0.1 概述 | 第13-14页 |
| 0.2 传染性造血器官坏死病毒分子生物学研究进展 | 第14-15页 |
| 0.2.1 IHNV的生物学特性 | 第14页 |
| 0.2.2 IHN的临床症状 | 第14页 |
| 0.2.3 流行特点 | 第14-15页 |
| 0.3 IHNV的检测 | 第15-17页 |
| 0.3.1 细胞培养技术 | 第16页 |
| 0.3.2 免疫学方法 | 第16页 |
| 0.3.3 分子生物学方法 | 第16-17页 |
| 0.4 表达纯化 | 第17-18页 |
| 0.4.1 包涵体的洗涤 | 第17页 |
| 0.4.2 包涵体的变性溶解 | 第17页 |
| 0.4.3 影响包涵体复性的物理因素 | 第17-18页 |
| 0.4.4 包涵体复性方法 | 第18页 |
| 0.5 本文目的和意义 | 第18-20页 |
| 第1章 IHNV-G蛋白的原核表达载体的构建 | 第20-28页 |
| 1.1 引言 | 第20页 |
| 1.2 实验材料 | 第20-22页 |
| 1.2.1 菌株和质粒 | 第20-21页 |
| 1.2.2 实验试剂 | 第21页 |
| 1.2.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 1.3 实验方法 | 第22-24页 |
| 1.3.2 病毒G蛋白基因序列设计及合成 | 第22页 |
| 1.3.3 pET-30a质粒及pMD-18重组质粒的制备 | 第22页 |
| 1.3.4 重组表达质粒pET-30a-IHNV-G的构建 | 第22-23页 |
| 1.3.5 阳性重组表达菌株大肠杆菌BL21(DE3)plySs的获得 | 第23-24页 |
| 1.4 结果 | 第24-26页 |
| 1.4.1 pET-30a质粒及pMD-18重组质粒的提取 | 第24页 |
| 1.4.2 粘性末端的制备 | 第24-25页 |
| 1.4.3 阳性重组质粒pET-30a-IHNV-G的双酶切验证 | 第25-26页 |
| 1.5 讨论 | 第26-28页 |
| 第2章 IHNV-G蛋白的表达条件优化及分离纯化 | 第28-38页 |
| 2.1 引言 | 第28-29页 |
| 2.2 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.2.1 菌株 | 第29页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第29页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第29页 |
| 2.2.4 溶液配制 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-33页 |
| 2.3.1 pET-30a-IHNV-G转化菌株BL21(DE3)plySs的活化与诱导表达 | 第30页 |
| 2.3.2 诱导产物的SDS-PAGE分析 | 第30-31页 |
| 2.3.3 WesternBlot对目的蛋白进行检验 | 第31页 |
| 2.3.4 IHNV-G表达工艺优化 | 第31-32页 |
| 2.3.5 IHNV-G蛋白的表达方式分析 | 第32页 |
| 2.3.6 IHNV-G蛋白的分离纯化 | 第32-33页 |
| 2.4 实验结果 | 第33-37页 |
| 2.4.1 IHNV-G蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第33-34页 |
| 2.4.2 IHNV-G蛋白的Westernblot鉴定 | 第34页 |
| 2.4.3 IHNV-G蛋白表达条件优化 | 第34-35页 |
| 2.4.4 IHNV-G蛋白的表达方式分析 | 第35-36页 |
| 2.4.5 IHNV-G蛋白包涵体的纯化 | 第36-37页 |
| 2.5 讨论 | 第37-38页 |
| 第3章 IHNV-G蛋白多克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立 | 第38-46页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料 | 第38-40页 |
| 3.2.1 病毒和动物 | 第38-39页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第39页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第39页 |
| 3.2.4 溶液配制 | 第39-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.3.1 病毒制备 | 第40页 |
| 3.3.2 兔抗IHNV血清的制备 | 第40-41页 |
| 3.3.3 实验白兔血清抗体效价的测定 | 第41页 |
| 3.3.4 IHNV-G蛋白抗血清与IHNV反应 | 第41页 |
| 3.3.5 兔抗IHNV血清介导的间接ELISA试验 | 第41-42页 |
| 3.3.6 ELISA检测的特异性 | 第42页 |
| 3.3.7 ELISA检测与PCR检测的符合率 | 第42页 |
| 3.4 实验结果 | 第42-44页 |
| 3.4.1 IHNV悬液的蛋白含量 | 第42页 |
| 3.4.2 免疫实验白兔血清抗体效价的测定 | 第42-43页 |
| 3.4.3 IHNV-G蛋白抗血清与IHNV反应 | 第43-44页 |
| 3.4.4 ELISA检测的特异性结果 | 第44页 |
| 3.4.5 水产样品检测 | 第44页 |
| 3.5 讨论 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第52-53页 |
