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橡胶树叶片蔗糖代谢关键酶的酶学和基因表达特性研究

摘要第4-5页
Abstract第5-6页
1 前言第9-19页
    1.1 天然橡胶的研究及应用现状第9-10页
    1.2 橡胶树的产胶细胞(乳管)及其特化细胞器第10-11页
    1.3 NR的生物合成途径第11-12页
    1.4 胶乳再生第12-13页
    1.5 蔗糖代谢及运输第13-16页
        1.5.1 转化酶第15-16页
        1.5.2 蔗糖合成酶第16页
        1.5.3 蔗糖磷酸合成酶第16页
    1.6 可溶性糖的测定方法分类第16-17页
        1.6.1 化学法第16页
        1.6.2 气相色谱法第16-17页
        1.6.3 液相色谱法第17页
    1.7 研究目的与意义第17-18页
    1.8 本研究的技术路线第18-19页
2 材料与方法第19-31页
    2.1 材料与试剂第19-20页
        2.1.1 热研7-33-97简介第19页
        2.1.2 实验材料第19页
        2.1.3 质粒及菌种第19页
        2.1.4 试剂第19-20页
        2.1.5 实验仪器第20页
    2.2 橡胶树叶片蔗糖代谢相关酶的活性测定第20-24页
        2.2.1 蔗糖代谢相关酶粗酶液的提取及保存第20-21页
        2.2.2 蛋白含量测定第21页
        2.2.3 Inv及Sus分解活性的测定第21-22页
        2.2.4 Sus合成活性及SPS合成活性的测定第22-24页
    2.3 橡胶树叶片可溶性糖及淀粉含量的测定第24-25页
        2.3.1 叶片中可溶性糖的提取第24页
        2.3.2 叶片中可溶性糖含量测定第24-25页
        2.3.3 叶片中淀粉的提取及含量测定第25页
    2.4 橡胶树叶片蔗糖代谢关键酶基因克隆、表达分析及内参基因的筛选第25-31页
        2.4.1 橡胶树不同组织RNA的提取第25页
        2.4.2 总RNA完整性电泳检测第25页
        2.4.3 总RNA样品中的基因组DNA的消化第25页
        2.4.4 逆转录合成cDNA第一链第25-26页
        2.4.5 橡胶树中碱性转化酶基因(NIN)、液泡转化酶基因(VIN)、细胞壁转化酶基因(CWI)、蔗糖合成酶基因(Sus)和磷酸蔗糖合成酶基因(SPS)的克隆第26-28页
        2.4.6 HbNIN、HbCWI、HbVIN、HbSS和HbSPS基因荧光定量引物的筛选第28-29页
        2.4.7 内参基因筛选第29-31页
3 结果与分析第31-48页
    3.1 橡胶树叶片蔗糖代谢相关酶的酶动力学分析第31-36页
        3.1.1 蔗糖代谢酶的最适pH第31-32页
        3.1.2 蔗糖代谢酶的最适温度第32-33页
        3.1.3 蔗糖代谢酶的底物Km值和最大反应速率第33-35页
        3.1.4 蔗糖代谢酶的稳定性第35-36页
    3.2 蔗糖代谢关键酶在不同发育时期叶片中的酶活性变化第36-37页
    3.3 HPLC-ELSD测可溶性糖含量的条件筛选第37-40页
        3.3.1 流动相比例的优化第37-38页
        3.3.2 柱温的优化第38-39页
        3.3.3 氮气流速的优化第39页
        3.3.4 漂移管温度的优化第39-40页
    3.4 可溶性糖和淀粉在不同发育时期叶片中含量变化第40-41页
    3.5 橡胶树不同组织RNA提取及检测第41-42页
    3.6 不同发育时期叶片RNA的提取及检测第42页
    3.7 不同发育时期叶片cDNA样品扩增检测第42-43页
    3.8 叶片内参基因的筛选第43-44页
    3.9 荧光定量(qPCR)引物的筛选第44页
    3.10 蔗糖代谢关键酶基因在不同发育时期叶片中的表达模式分析第44-48页
        3.10.1 HbNIN各基因在不同发育时期叶片的表达模式第44-45页
        3.10.2 HbVIN各基因在不同发育时期叶片的表达模式第45-46页
        3.10.3 HbCWI各基因在不同发育时期叶片的表达模式第46页
        3.10.4 HbSPS各基因在不同发育时期叶片的表达模式第46-47页
        3.10.5 HbSus各基因在不同发育时期叶片的表达模式第47-48页
4 讨论第48-51页
    4.1 关于蔗糖代谢关键酶酶动力学相关值的测定第48-49页
    4.2 蔗糖代谢关键酶的活性和可溶性糖含量的关系第49-50页
    4.3 蔗糖代谢关键酶活性和基因表达模式的关系第50-51页
5 结论第51-52页
参考文献第52-58页
致谢第58-59页
作者在读期间科研成果简介第59页

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