| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| 1.1 天然橡胶的研究及应用现状 | 第9-10页 |
| 1.2 橡胶树的产胶细胞(乳管)及其特化细胞器 | 第10-11页 |
| 1.3 NR的生物合成途径 | 第11-12页 |
| 1.4 胶乳再生 | 第12-13页 |
| 1.5 蔗糖代谢及运输 | 第13-16页 |
| 1.5.1 转化酶 | 第15-16页 |
| 1.5.2 蔗糖合成酶 | 第16页 |
| 1.5.3 蔗糖磷酸合成酶 | 第16页 |
| 1.6 可溶性糖的测定方法分类 | 第16-17页 |
| 1.6.1 化学法 | 第16页 |
| 1.6.2 气相色谱法 | 第16-17页 |
| 1.6.3 液相色谱法 | 第17页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 1.8 本研究的技术路线 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-31页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.1 热研7-33-97简介 | 第19页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.3 质粒及菌种 | 第19页 |
| 2.1.4 试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第20页 |
| 2.2 橡胶树叶片蔗糖代谢相关酶的活性测定 | 第20-24页 |
| 2.2.1 蔗糖代谢相关酶粗酶液的提取及保存 | 第20-21页 |
| 2.2.2 蛋白含量测定 | 第21页 |
| 2.2.3 Inv及Sus分解活性的测定 | 第21-22页 |
| 2.2.4 Sus合成活性及SPS合成活性的测定 | 第22-24页 |
| 2.3 橡胶树叶片可溶性糖及淀粉含量的测定 | 第24-25页 |
| 2.3.1 叶片中可溶性糖的提取 | 第24页 |
| 2.3.2 叶片中可溶性糖含量测定 | 第24-25页 |
| 2.3.3 叶片中淀粉的提取及含量测定 | 第25页 |
| 2.4 橡胶树叶片蔗糖代谢关键酶基因克隆、表达分析及内参基因的筛选 | 第25-31页 |
| 2.4.1 橡胶树不同组织RNA的提取 | 第25页 |
| 2.4.2 总RNA完整性电泳检测 | 第25页 |
| 2.4.3 总RNA样品中的基因组DNA的消化 | 第25页 |
| 2.4.4 逆转录合成cDNA第一链 | 第25-26页 |
| 2.4.5 橡胶树中碱性转化酶基因(NIN)、液泡转化酶基因(VIN)、细胞壁转化酶基因(CWI)、蔗糖合成酶基因(Sus)和磷酸蔗糖合成酶基因(SPS)的克隆 | 第26-28页 |
| 2.4.6 HbNIN、HbCWI、HbVIN、HbSS和HbSPS基因荧光定量引物的筛选 | 第28-29页 |
| 2.4.7 内参基因筛选 | 第29-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-48页 |
| 3.1 橡胶树叶片蔗糖代谢相关酶的酶动力学分析 | 第31-36页 |
| 3.1.1 蔗糖代谢酶的最适pH | 第31-32页 |
| 3.1.2 蔗糖代谢酶的最适温度 | 第32-33页 |
| 3.1.3 蔗糖代谢酶的底物Km值和最大反应速率 | 第33-35页 |
| 3.1.4 蔗糖代谢酶的稳定性 | 第35-36页 |
| 3.2 蔗糖代谢关键酶在不同发育时期叶片中的酶活性变化 | 第36-37页 |
| 3.3 HPLC-ELSD测可溶性糖含量的条件筛选 | 第37-40页 |
| 3.3.1 流动相比例的优化 | 第37-38页 |
| 3.3.2 柱温的优化 | 第38-39页 |
| 3.3.3 氮气流速的优化 | 第39页 |
| 3.3.4 漂移管温度的优化 | 第39-40页 |
| 3.4 可溶性糖和淀粉在不同发育时期叶片中含量变化 | 第40-41页 |
| 3.5 橡胶树不同组织RNA提取及检测 | 第41-42页 |
| 3.6 不同发育时期叶片RNA的提取及检测 | 第42页 |
| 3.7 不同发育时期叶片cDNA样品扩增检测 | 第42-43页 |
| 3.8 叶片内参基因的筛选 | 第43-44页 |
| 3.9 荧光定量(qPCR)引物的筛选 | 第44页 |
| 3.10 蔗糖代谢关键酶基因在不同发育时期叶片中的表达模式分析 | 第44-48页 |
| 3.10.1 HbNIN各基因在不同发育时期叶片的表达模式 | 第44-45页 |
| 3.10.2 HbVIN各基因在不同发育时期叶片的表达模式 | 第45-46页 |
| 3.10.3 HbCWI各基因在不同发育时期叶片的表达模式 | 第46页 |
| 3.10.4 HbSPS各基因在不同发育时期叶片的表达模式 | 第46-47页 |
| 3.10.5 HbSus各基因在不同发育时期叶片的表达模式 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 4.1 关于蔗糖代谢关键酶酶动力学相关值的测定 | 第48-49页 |
| 4.2 蔗糖代谢关键酶的活性和可溶性糖含量的关系 | 第49-50页 |
| 4.3 蔗糖代谢关键酶活性和基因表达模式的关系 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者在读期间科研成果简介 | 第59页 |
