| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 英文缩写符号及中英文对照表 | 第12-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-42页 |
| 1.1 海蓬子属植物药理活性及其作用机制研究进展 | 第16-21页 |
| 1.1.1 抗氧化和美白作用 | 第16-17页 |
| 1.1.2 抗肿瘤活性 | 第17-18页 |
| 1.1.3 抗炎活性 | 第18-19页 |
| 1.1.4 调节免疫 | 第19页 |
| 1.1.5 降糖降血脂作用 | 第19-21页 |
| 1.2 癌症中程序性细胞死亡研究进展 | 第21-31页 |
| 1.2.1. 程序性细胞死亡概述 | 第21-22页 |
| 1.2.2. 程序性细胞死亡和癌症 | 第22-24页 |
| 1.2.3. 癌症的凋亡通路 | 第24-27页 |
| 1.2.4. 癌症的自噬通路 | 第27-30页 |
| 1.2.5. 癌症的程序性坏死通路 | 第30-31页 |
| 1.3 MAPK通路调控细胞凋亡和自噬的研究进展 | 第31-41页 |
| 1.3.1 p38信号通路 | 第32-35页 |
| 1.3.2 JNK信号通路 | 第35-37页 |
| 1.3.3 ERK信号通路 | 第37-41页 |
| 1.4 本研究的目的和内容 | 第41-42页 |
| 第二章 海蓬子降三萜皂苷体内外抗肿瘤活性研究 | 第42-62页 |
| 2.1 实验材料 | 第43-47页 |
| 2.1.1 实验样品 | 第43-45页 |
| 2.1.2 细胞株 | 第45页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第45页 |
| 2.1.4 仪器 | 第45-46页 |
| 2.1.5 主要试剂配制方法 | 第46-47页 |
| 2.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第47-48页 |
| 2.2.2 MTT法测样品作用后肿瘤细胞的存活率 | 第48页 |
| 2.2.3 克隆形成实验检测细胞克隆形成能力 | 第48页 |
| 2.2.4 海蓬子皂苷甲对对小鼠静脉注射的急性毒性研究 | 第48-49页 |
| 2.2.5 海蓬子皂苷甲对MCF-7细胞裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用 | 第49页 |
| 2.3 结果与分析 | 第49-59页 |
| 2.3.1 21个皂苷的细胞毒作用及其构效分析 | 第49-54页 |
| 2.3.2 两种新降三萜皂苷在体外抑制多种肿瘤细胞系增殖 | 第54页 |
| 2.3.3 两种新降三萜皂苷可在体外抑制乳腺癌来源不同肿瘤细胞系的增殖 | 第54-55页 |
| 2.3.4 两种新降三萜皂苷对乳腺癌细胞MCF7作用的时间依赖性 | 第55页 |
| 2.3.5 两种新降三萜皂苷对乳腺癌细胞MCF7作用后的细胞形态学变化 | 第55-56页 |
| 2.3.6 两种新降三萜皂苷对乳腺癌细胞MCF7的克隆形成能力的影响 | 第56-57页 |
| 2.3.7 海蓬子皂苷甲对小鼠静脉注射的急性毒性研究 | 第57页 |
| 2.3.8 海蓬子皂苷甲抑制乳腺癌MCF7细胞裸鼠移植瘤生长 | 第57-59页 |
| 2.4 讨论与结论 | 第59-62页 |
| 第三章 海蓬子皂苷甲诱导细胞凋亡作用及其机制研究 | 第62-84页 |
| 3.1 实验材料 | 第62-66页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第63页 |
| 3.1.2 主要药品与试剂 | 第63页 |
| 3.1.3 仪器 | 第63页 |
| 3.1.4 主要试剂配制方法 | 第63-66页 |
| 3.2 实验方法 | 第66-72页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第66页 |
| 3.2.2 Hoechst染色定性测凋亡 | 第66页 |
| 3.2.3 Annexin V-PE/7-AAD双染法测凋亡 | 第66-67页 |
| 3.2.4 PI单染法定量检测细胞凋亡和细胞周期 | 第67-68页 |
| 3.2.5 Rh123测线粒体膜电位 | 第68页 |
| 3.2.6 Western blot检测凋亡蛋白的表达 | 第68-69页 |
| 3.2.7 MTT法测Caspase泛抑制剂Z-VAD-FMK逆转BA诱导的细胞增殖抑制作用 | 第69页 |
| 3.2.8 Western blot检测细胞质和细胞核中的p-p65和p65表达 | 第69-70页 |
| 3.2.9 免疫荧光检测p65核转位 | 第70-71页 |
| 3.2.10 EMSA检测检测NF-κB与DNA的结合 | 第71-72页 |
| 3.2.11 统计学处理 | 第72页 |
| 3.3 结果与分析 | 第72-81页 |
| 3.3.1 Hoechst染色法检测海蓬子皂苷甲 | 第73页 |
| 3.3.2 海蓬子皂苷甲增加Annexin V-PE和7-AAD染色双阳性细胞 | 第73-74页 |
| 3.3.3 海蓬子皂苷甲PI单染测周期 | 第74-75页 |
| 3.3.4 Western检测凋亡蛋白 | 第75页 |
| 3.3.5 线粒体膜电位 | 第75-76页 |
| 3.3.6 Caspase泛抑制剂的逆转效果 | 第76-77页 |
| 3.3.7 海蓬子皂苷甲作用后细胞质和细胞核中p-p65和p65的表达变化 | 第77-78页 |
| 3.3.8 免疫荧光检测海蓬子皂苷甲作用后p65的移位 | 第78-79页 |
| 3.3.9 EMSA检测检测NF-κB与DNA的结合 | 第79页 |
| 3.3.10 海蓬子皂苷甲对上游调控NF-κB的细胞因子的影响 | 第79-80页 |
| 3.3.11 海蓬子皂苷甲对NF-κB调控的下游凋亡相关分子的影响 | 第80-81页 |
| 3.4 讨论与结论 | 第81-84页 |
| 第四章 海蓬子皂苷甲诱导细胞自噬作用及其机制研究 | 第84-94页 |
| 4.1 实验材料 | 第84-85页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第84页 |
| 4.1.2 主要药品与试剂 | 第84-85页 |
| 4.1.3 仪器 | 第85页 |
| 4.1.4 主要试剂配制方法 | 第85页 |
| 4.2 实验方法 | 第85-86页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第85页 |
| 4.2.2 吖啶橙染色检测细胞自噬 | 第85页 |
| 4.2.3 MDC流式检测细胞自噬 | 第85-86页 |
| 4.2.4 Western检测自噬相关蛋白的表达 | 第86页 |
| 4.2.5 Western blot检测mTOR信号通路 | 第86页 |
| 4.2.6 自噬抑制剂3-MA可增强BA的细胞毒作用 | 第86页 |
| 4.3 结果与分析 | 第86-92页 |
| 4.3.1 AO染色法检测海蓬子皂苷甲刺激后自噬泡增加 | 第86-87页 |
| 4.3.2 流式检测海蓬子皂苷甲刺激后自噬泡增加 | 第87-88页 |
| 4.3.3 Western检测自噬相关蛋白 | 第88-89页 |
| 4.3.4 Western检测mTOR信号通路 | 第89-90页 |
| 4.3.5 海蓬子皂苷甲抑制mTOR上游Akt和p-ERK的蛋白表达 | 第90-91页 |
| 4.3.6 自噬抑制剂3-MA可提高海蓬子皂苷甲的细胞毒作用 | 第91-92页 |
| 4.4 讨论与结论 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-112页 |
| 全文总结 | 第112-114页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第114-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
