| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文章综述 | 第11-19页 |
| 1 研究问题的由来 | 第11页 |
| 2 精子发生 | 第11-14页 |
| 2.1 精子发生过程 | 第11-12页 |
| 2.2 睾丸支持细胞在精子发生中的功能 | 第12-14页 |
| 3 雄激素受体基因研究进展 | 第14-15页 |
| 4 RNF4基因研究进展 | 第15页 |
| 5 miRNA在精子发生过程中的研究 | 第15-17页 |
| 5.1 miRNA在精子发生过程中的功能研究 | 第15-17页 |
| 5.2 miR-124a的研究进展 | 第17页 |
| 6 研究目的与意义 | 第17-19页 |
| 第二章 AR调控未成熟猪睾丸支持细胞增殖的分子机制研究 | 第19-59页 |
| 1 试验材料 | 第19-24页 |
| 1.1 细胞系 | 第19页 |
| 1.2 组织 | 第19页 |
| 1.3 菌株、载体和抗体 | 第19-21页 |
| 1.4 主要仪器和设备 | 第21-22页 |
| 1.5 主要试剂与试剂盒 | 第22-23页 |
| 1.6 常用试剂及配制 | 第23-24页 |
| 1.7 生物信息学网站及分析软件 | 第24页 |
| 1.8 统计学方法 | 第24页 |
| 2 试验方法 | 第24-42页 |
| 2.1 RNF4与AR的互作 | 第24-31页 |
| 2.1.1 AR含HA标签载体构建 | 第24-28页 |
| 2.1.2 细胞的复苏 | 第28页 |
| 2.1.3 细胞的培养 | 第28页 |
| 2.1.4 细胞的冻存 | 第28页 |
| 2.1.5 细胞的转染 | 第28-29页 |
| 2.1.6 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP) | 第29-30页 |
| 2.1.7 Westernblot | 第30-31页 |
| 2.2 AR的功能研究 | 第31-37页 |
| 2.2.0 猪睾丸组织切片免疫荧光 | 第31-32页 |
| 2.2.1 AR真核表达载体构建及干扰片段合成 | 第32页 |
| 2.2.2 细胞转染 | 第32页 |
| 2.2.3 细胞总RNA提取 | 第32-33页 |
| 2.2.4 cDNA的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR检测AR及相关基因mRNA表达水平 | 第34-35页 |
| 2.2.6 总蛋白提取 | 第35页 |
| 2.2.7 蛋白浓度的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.8 Westernblot | 第36页 |
| 2.2.9 流式细胞术分析细胞周期 | 第36页 |
| 2.2.10 Cellcountingkit-8(CCK-8)检测细胞增殖 | 第36-37页 |
| 2.3 miR-124a功能研究 | 第37-42页 |
| 2.3.1 AR的靶miRNA预测 | 第37页 |
| 2.3.2 双荧光素酶报告载体的构建 | 第37-38页 |
| 2.3.3 miR-124a模拟物和抑制物的合成 | 第38页 |
| 2.3.4 细胞转染 | 第38-39页 |
| 2.3.5 双荧光素酶活性检测 | 第39页 |
| 2.3.6 突变型双荧光素酶报告载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.3.7 细胞总RNA提取 | 第40页 |
| 2.3.8 cDNA制备 | 第40-41页 |
| 2.3.9 实时荧光定量PCR检测miR-124a和基因mRNA的表达水平 | 第41页 |
| 2.3.10 细胞总蛋白提取 | 第41页 |
| 2.3.11 蛋白浓度测定 | 第41页 |
| 2.3.12 Westernblot | 第41页 |
| 2.3.13 流式细胞术分析细胞周期 | 第41-42页 |
| 2.3.14 CCK8分析细胞增殖 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-56页 |
| 3.1 RNF4与AR互作关系的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2 AR对细胞的影响 | 第43-49页 |
| 3.2.1 AR在猪睾丸组织中的表达 | 第43-44页 |
| 3.2.2 AR超表达与抑制表达验证 | 第44-45页 |
| 3.2.3 AR对细胞周期的影响 | 第45-47页 |
| 3.2.4 AR对细胞增殖的影响 | 第47-49页 |
| 3.2.5 缺失AR基因DBD对细胞周期和增殖的影响 | 第49页 |
| 3.3 miR-124a与AR基因3’UTR的验证 | 第49-53页 |
| 3.3.1 AR靶miRNA预测 | 第49-50页 |
| 3.3.2 靶位点验证 | 第50-52页 |
| 3.3.3 miR-124a对AR基因表达调控的验证 | 第52-53页 |
| 3.4 miR-124a对细胞的影响 | 第53-56页 |
| 3.4.1 miR-124a对细胞周期的影响 | 第53-55页 |
| 3.4.2 miR-124a对细胞增殖的影响 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 4.1 睾丸支持细胞增殖的研究 | 第56-57页 |
| 4.2 RNF4与AR的互作 | 第57-58页 |
| 4.3 miR-124a、AR与未成熟猪睾丸支持细胞增殖 | 第58-59页 |
| 第三章 结语 | 第59-60页 |
| 1 主要结论 | 第59页 |
| 2 下一步工作 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
