| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 名词略词表(ABBREVIATIONS) | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 植物MAPK途径 | 第11-12页 |
| 1.2 MAPK级联途径在植物中的功能研究 | 第12-14页 |
| 1.3 植物中非典型MAPK级联途径 | 第14-15页 |
| 1.4 水稻MAPK级联途径的研究 | 第15-17页 |
| 1.5 酵母双杂交技术 | 第17-18页 |
| 1.5.1 酵母双杂交技术的原理 | 第17页 |
| 1.5.2 酵母双杂交技术的应用 | 第17-18页 |
| 1.5.3 酵母双杂交技术的优缺点 | 第18页 |
| 1.6 CRISPR/CAS9技术及其在植物中应用 | 第18-19页 |
| 1.7 研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-45页 |
| 2.1 材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第21-23页 |
| 2.1.3 分子生物学试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-45页 |
| 2.2.1 Y2H和BiFC载体构建 | 第24-30页 |
| 2.2.2 酵母筛库 | 第30-34页 |
| 2.2.3 BiFC验证Y2H筛选候选蛋白与靶蛋白互作 | 第34-35页 |
| 2.2.4 双靶点CRISPR/Cas9载体构建 | 第35-38页 |
| 2.2.5 CRISPR构建完成质粒转化转化农杆菌 | 第38-39页 |
| 2.2.6 农杆菌介导的水稻愈伤组织的转化 | 第39-40页 |
| 2.2.7 CTAB法提取水稻DNA | 第40-41页 |
| 2.2.8 水稻材料总RNA提取 | 第41-42页 |
| 2.2.9 反转录(cDNA第一链的合成) | 第42-43页 |
| 2.2.10 荧光定量PCR | 第43-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-65页 |
| 3.1 OSMKK1和OSMKK6基因的生物信息学分析 | 第45-49页 |
| 3.2 酵母双杂交筛库 | 第49-56页 |
| 3.2.1 OsMKK1和OsMKK6酵母双杂交筛库Bait和Prey载体构建 | 第49页 |
| 3.2.2 pGBKT7-MKK1和pGBKT7-MKK6重组质粒转化酵母菌AH109 | 第49-50页 |
| 3.2.3 诱饵蛋白MKK1和MKK6的自激活验证 | 第50-51页 |
| 3.2.4 酵母双杂交筛选水稻幼苗cDNA文库 | 第51-56页 |
| 3.3 BIFC互作验证 | 第56-60页 |
| 3.3.1 BiFC相关载体的构建 | 第56-58页 |
| 3.3.2 BiFC结果 | 第58-60页 |
| 3.4 转基因材料构建 | 第60-63页 |
| 3.4.1 CRISPR载体构建 | 第60-61页 |
| 3.4.2 转基因阳性苗检测阳性苗 | 第61-63页 |
| 3.5 荧光定量PCR结果 | 第63-65页 |
| 3.5.1 荧光定量PCR引物设计及cDNA获得 | 第63-64页 |
| 3.5.2 OsMKK1和OsMKK6转基因水稻株系中基因表达检测 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-68页 |
| 4.1 利用酵母双杂交文库筛选与MAPK途径成员互作的蛋白 | 第65页 |
| 4.2 蛋白质互作鉴定方法的比较 | 第65-66页 |
| 4.3 OSMKK1和OSMKK6互作蛋白的多样性和复杂性 | 第66-67页 |
| 4.4 CRISPR/CAS9系统在植物MAPK基因功能研究中的应用 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-77页 |
| 附录 | 第77-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
