| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-19页 |
| 1.1 淀粉和淀粉水解酶 | 第8页 |
| 1.2 普鲁兰及普鲁兰酶 | 第8-10页 |
| 1.2.1 普鲁兰糖 | 第9-10页 |
| 1.2.2 普鲁兰酶简介 | 第10页 |
| 1.3 普鲁兰酶的来源 | 第10-11页 |
| 1.4 普鲁兰酶的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.4.1 普鲁兰酶研究的初期阶段 | 第11-12页 |
| 1.4.2 普鲁兰酶研究的发展阶段 | 第12页 |
| 1.4.3 基因工程等相关生物技术在普鲁兰酶研究中的应用阶段 | 第12-14页 |
| 1.5 普鲁兰酶的作用机制及其结构 | 第14-15页 |
| 1.5.1 普鲁兰酶的作用机制 | 第14页 |
| 1.5.2 普鲁兰酶的催化结构 | 第14-15页 |
| 1.6 普鲁兰酶的应用 | 第15-18页 |
| 1.6.1 普鲁兰酶在食品工业中的应用 | 第15-17页 |
| 1.6.1.1 普鲁兰酶在在高葡萄糖浆生产中的应用 | 第15-16页 |
| 1.6.1.2 普鲁兰酶在高麦芽糖浆生产中的应用 | 第16页 |
| 1.6.1.3 普鲁兰酶在酿酒中的应用 | 第16-17页 |
| 1.6.2 普鲁兰酶在饲料工业中的应用 | 第17页 |
| 1.6.3 普鲁兰酶在生产直链淀粉中的应用 | 第17页 |
| 1.6.4 普鲁兰酶的其它应用 | 第17-18页 |
| 1.7 研究目的及内容 | 第18-19页 |
| 1.7.1 研究目的 | 第18页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 2 引言 | 第19-20页 |
| 3 材料和方法 | 第20-29页 |
| 3.1 材料 | 第20-21页 |
| 3.1.1 土样 | 第20页 |
| 3.1.2 筛选出菌株 | 第20页 |
| 3.1.3 试剂和溶液 | 第20页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第20页 |
| 3.1.5 主要培养基 | 第20-21页 |
| 3.2 方法 | 第21-29页 |
| 3.2.1 普鲁兰酶产生菌的初筛 | 第21页 |
| 3.2.2 菌株的复筛 | 第21页 |
| 3.2.3 菌种鉴定 | 第21-22页 |
| 3.2.3.1 菌种的液体培养 | 第21页 |
| 3.2.3.2 菌株的生理生化实验分类鉴定及其形态鉴定 | 第21页 |
| 3.2.3.3 基因组DNA的提取及16SrDNA序列测定 | 第21-22页 |
| 3.2.3.4 ITS序列分析 | 第22页 |
| 3.2.4 制备发酵用种子液 | 第22页 |
| 3.2.5 产酶液体发酵 | 第22页 |
| 3.2.6 粗酶液的提取 | 第22页 |
| 3.2.7 普鲁兰酶酶活力测定 | 第22-23页 |
| 3.2.8 蛋白含量测定(考马斯亮蓝法) | 第23-24页 |
| 3.2.9 相关公式计算 | 第24页 |
| 3.2.10 发酵条件的优化 | 第24-25页 |
| 3.2.11 普鲁兰酶的分离纯化 | 第25-26页 |
| 3.2.11.1 透析袋处理 | 第25页 |
| 3.2.11.2 盐析 | 第25页 |
| 3.2.11.3 Sephadex G-25凝胶柱 | 第25页 |
| 3.2.11.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第25-26页 |
| 3.2.12 酶学性质研究 | 第26-27页 |
| 3.2.12.1 酶液对不同底物的特异性分析 | 第26页 |
| 3.2.12.2 酶液对普鲁兰糖的水解效果分析（TLC法） | 第26-27页 |
| 3.2.12.3 酶反应的最适pH | 第27页 |
| 3.2.12.4 酶反应最适温度 | 第27页 |
| 3.2.12.5 酶的温度稳定性 | 第27页 |
| 3.2.12.6 酶的pH稳定性 | 第27页 |
| 3.2.12.7 不同金属离子对普鲁兰酶活力的影响 | 第27页 |
| 3.2.13 普鲁兰酶基因的克隆 | 第27-29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-45页 |
| 4.1 菌种的筛选和鉴定 | 第29-32页 |
| 4.1.1 菌种的初步筛选结果 | 第29页 |
| 4.1.2 菌株进行复筛后结果 | 第29-30页 |
| 4.1.3 菌株的鉴定 | 第30-32页 |
| 4.1.3.1 菌株的形态及生理生化特性 | 第30页 |
| 4.1.3.2 菌株的形态及生理生化特性 | 第30-32页 |
| 4.2 产酶条件的优化 | 第32-37页 |
| 4.2.1 不同氮源对产酶的影响 | 第32页 |
| 4.2.2 蛋白胨初始浓度对产酶的影响 | 第32页 |
| 4.2.3 不同碳源对产酶的影响 | 第32-33页 |
| 4.2.4 玉米淀粉初始浓度对产酶的影响 | 第33页 |
| 4.2.5 种子培养时间 | 第33-34页 |
| 4.2.6 接种量对产酶的影响 | 第34页 |
| 4.2.7 培养基装液量对产酶的影响 | 第34-35页 |
| 4.2.8 培养基初始pH对产酶的影响 | 第35-36页 |
| 4.2.9 发酵温度对产酶的影响 | 第36页 |
| 4.2.10 摇床转速对产酶的影响 | 第36页 |
| 4.2.11 普鲁兰酶发酵产酶历程 | 第36-37页 |
| 4.3 普鲁兰酶的纯化 | 第37-39页 |
| 4.3.1 硫酸铵沉淀结果 | 第37页 |
| 4.3.2 G-25凝胶柱层析结果 | 第37页 |
| 4.3.3 Sephadex G-100凝胶柱层析结果 | 第37-38页 |
| 4.3.4 纯化结果 | 第38页 |
| 4.3.5 SDS-PAGE电泳分析 | 第38-39页 |
| 4.4 普鲁兰酶的性质 | 第39-42页 |
| 4.4.1 酶液对不同底物的特异性分析 | 第39页 |
| 4.4.2 酶液对普鲁兰糖的水解效果分析 | 第39-40页 |
| 4.4.3 酶反应最适温度 | 第40页 |
| 4.4.4 酶反应的最适pH | 第40-41页 |
| 4.4.5 酶的温度稳定性 | 第41页 |
| 4.4.6 酶的pH稳定性 | 第41-42页 |
| 4.4.7 不同金属离子对普鲁兰酶活力的影响 | 第42页 |
| 4.5 普鲁兰酶基因的克隆 | 第42-45页 |
| 4.5.1 引物设计 | 第42-43页 |
| 4.5.2 普鲁兰酶基因测序结果 | 第43-45页 |
| 5 结论与讨论 | 第45-46页 |
| 6 参考文献 | 第46-52页 |
| Abstract | 第52页 |
| 致谢 | 第53页 |
