| 摘要 | 第4-12页 |
| Abstract | 第12-18页 |
| 引言 | 第22-36页 |
| 1 Corin的分子结构与活化 | 第23-24页 |
| 2 Corin功能失衡与心血管疾病 | 第24-26页 |
| 3 Corin蛋白的细胞内表达运输与酶原活化 | 第26-27页 |
| 4 Corin胞内段与其胞内转运、质膜锚定的关系 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-36页 |
| 第一章 高血压患者群体中Corin基因型分析及功能研究 | 第36-79页 |
| 前言 | 第36-37页 |
| 1 实验材料 | 第37-42页 |
| 1.1 血液及DNA标本 | 第37页 |
| 1.2 细胞系及细胞培养 | 第37页 |
| 1.3 主要实验材料与试剂: | 第37-39页 |
| 1.4 主要设备仪器 | 第39-40页 |
| 1.5 主要缓冲液及配制方法 | 第40-42页 |
| 2 实验方法 | 第42-52页 |
| 2.1 正常人及高血压患者病例收集 | 第42页 |
| 2.2 血浆corin水平检测 | 第42-43页 |
| 2.3 血浆利钠肽水平检测 | 第43-44页 |
| 2.4 全血基因组DNA提取 | 第44-45页 |
| 2.5 PCR引物设计 | 第45-47页 |
| 2.6 PCR扩增及测序分析 | 第47页 |
| 2.7 构建corin突变体表达质粒 | 第47-49页 |
| 2.8 细胞转染和蛋白印记检测 | 第49-50页 |
| 2.9 Corin突变体活化pro-ANP能力的研究 | 第50-51页 |
| 2.10 流式细胞术(Flow Cytometry) | 第51页 |
| 2.11 免疫荧光染色(Immunofluorescent Staining) | 第51页 |
| 2.12 Corin分子结构模型构建 | 第51-52页 |
| 2.13 Corin与PCSK6共转染 | 第52页 |
| 2.14 R530S和WT corin共转染 | 第52页 |
| 2.15 数据统计与分析 | 第52页 |
| 3 实验结果 | 第52-69页 |
| 3.1 高血压患者和正常人基本信息 | 第52-53页 |
| 3.2 CORIN基因变异体筛查及分析 | 第53-57页 |
| 3.3 CORIN基因变异体表达及功能研究 | 第57-61页 |
| 3.4 R530S和T924M变异对corin蛋白在细胞膜表达的影响 | 第61-62页 |
| 3.5 R530S和T924M变异对corin从细胞膜shedding的影响 | 第62-64页 |
| 3.6 R530S和T924M corin蛋白的细胞亚定位 | 第64-65页 |
| 3.7 R530S和T924M变异对corin蛋白质结构的影响 | 第65-67页 |
| 3.8 PCSK6对R530S和T924M变异体的水解活化作用 | 第67页 |
| 3.9 R530S突变对WT corin表达及活化的影响 | 第67-68页 |
| 3.10 R530S变异对血浆可溶性corin、NT-pro-ANP和NT-pro-BNP水平的影响 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 第二章 Corin胞内段的细胞内滞留信号研究 | 第79-100页 |
| 前言 | 第79-80页 |
| 1 实验材料 | 第80-81页 |
| 1.1 细胞系 | 第80页 |
| 1.2 主要实验试剂与材料 | 第80-81页 |
| 1.3 主要仪器 | 第81页 |
| 1.4 主要缓冲液配方及配制方法 | 第81页 |
| 2 实验方法 | 第81-86页 |
| 2.1 构建CORIN基因突变体表达质粒 | 第81页 |
| 2.2 细胞转染与Western Blotting检测 | 第81-82页 |
| 2.3 流式细胞术 | 第82页 |
| 2.4 放线菌酮(cycloheximide,CHX)处理细胞 | 第82页 |
| 2.5 免疫荧光染色(immunofluorescentstaining) | 第82页 |
| 2.6 内切糖苷酶(Endo H)水解corin蛋白上的多糖链 | 第82-83页 |
| 2.7 DSP Cross-linking(交联反应) | 第83-84页 |
| 2.8 银染 | 第84-85页 |
| 2.9 统计分析 | 第85-86页 |
| 3 实验结果 | 第86-97页 |
| 3.1 GN motif导致corin蛋白酶原活化降低 | 第86-89页 |
| 3.2 GN motif对corin在细胞膜上表达的影响 | 第89-90页 |
| 3.3 GN motif对corin蛋白在细胞内转运过程的影响 | 第90-92页 |
| 3.4 GN motif对corin蛋白的亚细胞定位的影响 | 第92-96页 |
| 3.5 GN motif使corin蛋白在高尔基体内滞留的具体位置 | 第96-97页 |
| 4 讨论 | 第97-100页 |
| 总结 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-106页 |
| 综述 Ⅱ 型跨膜蛋白在高尔基体中滞留机制的研究进展 | 第106-123页 |
| 一、Ⅱ型跨膜蛋白在高尔基体中滞留的经典研究对象 | 第107-108页 |
| 二、寡聚化可导致某些Ⅱ型跨膜蛋白在高尔基体中滞留 | 第108页 |
| 三、跨膜区(TM)长度及序列改变与Ⅱ型跨膜蛋白的高尔基体滞留 | 第108-109页 |
| 四、有被运输小泡与Ⅱ型跨膜蛋白的滞留 | 第109-110页 |
| 五、氨基端特定序列与Ⅱ型跨膜蛋白的高尔基体滞留 | 第110-111页 |
| 六、羧基端特定序列与Ⅱ型跨膜蛋白的高尔基体滞留 | 第111页 |
| 小结 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-123页 |
| 博士学位期间发表的论文 | 第123-124页 |
| 本课题所获得基金资助 | 第124-125页 |
| 缩略词表 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
