| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 缩略语 | 第14-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-58页 |
| 1.1 概述 | 第18-19页 |
| 1.2 Sirtuin的发现 | 第19-20页 |
| 1.3 Sirtuin的结构与功 | 第20-33页 |
| 1.3.1 Sirtuin的结构特征 | 第20页 |
| 1.3.2 Sirtuin的功能概述 | 第20-22页 |
| 1.3.3 Sirtuin与衰老的关系 | 第22-24页 |
| 1.3.4 Sirtuin与染色质重塑 | 第24-25页 |
| 1.3.5 Sirtuin与癌症发生过程中的细胞命运决定 | 第25-29页 |
| 1.3.6 Sirtuin与组织、器官以及个体的发育 | 第29-30页 |
| 1.3.7 Sirtuin对感染及免疫反应的调控 | 第30页 |
| 1.3.8 Sirtuin对能量代谢的调控 | 第30-33页 |
| 1.4 Sirtuin靶向的应用前景 | 第33-34页 |
| 1.5 线粒体的生物学功能概述 | 第34-35页 |
| 1.6 线粒体与脂肪酸代谢 | 第35-36页 |
| 1.7 SIRT3与线粒体功能 | 第36-51页 |
| 1.7.1 SIRT3：定位于线粒体的Sirtuin家族成员 | 第37-38页 |
| 1.7.2 SIRT3参与能量代谢与ATP生成 | 第38-40页 |
| 1.7.3 SIRT3参与细胞内乙酸的代谢 | 第40-41页 |
| 1.7.4 SIRT3：肝脏代谢的调控枢纽 | 第41-44页 |
| 1.7.5 SIRT3调控棕色脂肪组织(BAT)的适应性产热 | 第44-45页 |
| 1.7.6 SIRT3在心脏的保护中的作用 | 第45-48页 |
| 1.7.7 SIRT3与氧化应激：SIRT3在衰老中的作用 | 第48-49页 |
| 1.7.8 SIRT3与癌症 | 第49-51页 |
| 1.8 SIRT3的基因结构与表达调控 | 第51-52页 |
| 1.9 脂肪细胞生物学 | 第52-55页 |
| 1.10 脂肪生成中的线粒体发育 | 第55-58页 |
| 第二章 猪Sirtuin基因的克隆、染色体定位与表达谱分析 | 第58-87页 |
| 1 前言 | 第58-59页 |
| 2 材料与方法 | 第59-72页 |
| 2.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第59页 |
| 2.1.2 RNA样品 | 第59页 |
| 2.1.3 DNA样品 | 第59页 |
| 2.1.4 载体及菌株 | 第59-60页 |
| 2.1.5 实验试剂 | 第60页 |
| 2.2 主要溶液配制 | 第60-61页 |
| 2.2.1 培养基及溶液配制 | 第60页 |
| 2.2.2 核酸电泳缓冲液配制 | 第60-61页 |
| 2.2.3 质粒抽提相关溶液配制 | 第61页 |
| 2.2.4 制备感受态细胞所用试剂 | 第61页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第61-62页 |
| 2.4 相关生物学软件 | 第62页 |
| 2.5 实验方法 | 第62-72页 |
| 2.5.1 组织总RNA的提取 | 第62-63页 |
| 2.5.2 总RNA的纯化处理 | 第63页 |
| 2.5.3 总RNA纯度鉴定及含量测定 | 第63-64页 |
| 2.5.4 cDNA的合成 | 第64页 |
| 2.5.5 组织DNA的提取 | 第64-65页 |
| 2.5.6 质粒DNA的大量提取 | 第65-66页 |
| 2.5.7 猪Sirtuin的CDS的PCR扩增 | 第66页 |
| 2.5.8 3’-RACE扩增Sirtuin的cDNA序列 | 第66-67页 |
| 2.5.9 猪SIRT1的内含子序列的扩增 | 第67页 |
| 2.5.10 PCR扩增产物的纯化 | 第67-68页 |
| 2.5.11 连接反应的建立 | 第68页 |
| 2.5.12 感受态细胞制备及转化 | 第68-69页 |
| 2.5.13 碱裂解法小量抽提质粒 | 第69-70页 |
| 2.5.14 猪Sirtuin家族基因的染色体定位 | 第70-71页 |
| 2.5.15 猪Sirtuin的组织表达谱分析 | 第71页 |
| 2.5.16 序列比对与进化分析 | 第71-72页 |
| 3 结果与分析 | 第72-85页 |
| 3.1 猪Sirtuin家族基因的克隆 | 第72-80页 |
| 3.1.1 猪Sirtuin家族基因的克隆与分析 | 第72-75页 |
| 3.1.2 猪SIRT1的基因组结构分析 | 第75-78页 |
| 3.1.3 猪SIRT6的两个剪接突变体的克隆与分析 | 第78-80页 |
| 3.2 猪Sirtuin家族基因的染色体定位 | 第80-81页 |
| 3.3 猪Sirtuin家族基因的组织表达谱鉴定 | 第81-83页 |
| 3.4 猪Sirtuin的遗传进化分析 | 第83-85页 |
| 4 讨论 | 第85-87页 |
| 第三章 脂肪生成中SIRT3的功能研究 | 第87-120页 |
| 1 前言 | 第87-88页 |
| 2 材料与方法 | 第88-99页 |
| 2.1 实验材料 | 第88-90页 |
| 2.1.1 实验材料、试剂与仪器 | 第88-89页 |
| 2.1.2 溶液配制 | 第89-90页 |
| 2.2 实验方法 | 第90-99页 |
| 2.2.1 3T3L1细胞培养及诱导成脂分化 | 第90页 |
| 2.2.2 细胞总RNA的提取及反转录 | 第90-92页 |
| 2.2.3 细胞总DNA的提取 | 第92页 |
| 2.2.4 定量PCR | 第92-93页 |
| 2.2.5 基因表达载体和启动子报告载体构建 | 第93页 |
| 2.2.6 质粒大量提取与纯化 | 第93-94页 |
| 2.2.7 细胞培养、处理及转染 | 第94-95页 |
| 2.2.8 双荧光素酶报告系统检测启动子活性 | 第95-96页 |
| 2.2.9 ChiP分析转录因子对启动子的结合 | 第96-98页 |
| 2.2.10 蛋白质相互作用分析 | 第98-99页 |
| 2.2.11 数据统计分析 | 第99页 |
| 3 结果与分析 | 第99-118页 |
| 3.1 3T3L1成脂分化过程中细胞内ROS的变化 | 第99-101页 |
| 3.2 3T3L1成脂分化过程中线粒体数量变化 | 第101-104页 |
| 3.3 3T3L1成脂分化前后代谢相关基因的表达变化与ROS生成 | 第104-105页 |
| 3.4 脂肪细胞分化与SIRT3表达调控 | 第105-106页 |
| 3.5 脂肪细胞分化诱导Beclin-1等自噬相关基因的表达 | 第106-107页 |
| 3.6 脂肪细胞分化过程中相关蛋白质的表达变化 | 第107-109页 |
| 3.7 PPAR-γ与SIRT3转录调控 | 第109-116页 |
| 3.7.1 SIRT3的启动子克隆与分析 | 第109-110页 |
| 3.7.2 PPAR-7对SIRT3启动子活性的影响以及位点依赖性 | 第110-112页 |
| 3.7.3 干扰PPAR-γ活性对SIRT3 mRNA表达的影响 | 第112-115页 |
| 3.7.4 PPAR-γ对SIRT3的启动子的结合 | 第115-116页 |
| 3.8 SIRT3与Beclin-1的相互作用分析 | 第116-117页 |
| 3.9 SIRT3和Beclin-1过量表达线粒体数量变化 | 第117-118页 |
| 4 讨论 | 第118-120页 |
| 第四章 结论、创新点与不足之处 | 第120-122页 |
| 1 结论 | 第120-121页 |
| 2 创新点 | 第121页 |
| 3 不足之处 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-142页 |
| 附录 | 第142-148页 |
| 研究生期间发表论文情况 | 第148-150页 |
| 致谢 | 第150页 |
