| 致谢 | 第4-11页 |
| 摘要 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 miRNA的发现和命名 | 第12页 |
| 1.2 miRNA的生物生成 | 第12-13页 |
| 1.3 miRNA的作用机制 | 第13页 |
| 1.4 miRNA的生物学功能 | 第13-15页 |
| 1.4.1 miRNA与生长发育 | 第13-14页 |
| 1.4.2 miRNA与糖代谢 | 第14页 |
| 1.4.3 miRNA与脂代谢 | 第14-15页 |
| 1.4.4 miRNA与细胞增殖、分化 | 第15页 |
| 1.5 miRNA定量检测方法 | 第15-17页 |
| 1.5.1 Northern blot | 第15页 |
| 1.5.2 微阵列芯片 | 第15页 |
| 1.5.3 荧光定量PCR | 第15-17页 |
| 1.5.3.1 RNA加尾和引物延伸逆转录法 | 第16页 |
| 1.5.3.2 茎环引物法 | 第16-17页 |
| 1.5.6 高通量测序 | 第17页 |
| 1.6 MiRNA靶基因的预测 | 第17-18页 |
| 1.6.1 基于序列互补的靶基因预测 | 第17-18页 |
| 1.6.2 基于计算机学习的靶基因预测 | 第18页 |
| 1.7 miRNA靶基因的鉴定 | 第18-19页 |
| 1.7.1 双荧光素酶报告系统 | 第18-19页 |
| 1.7.2 Western blot | 第19页 |
| 1.7.3 紫外交联免疫沉淀结合高通量测序 | 第19页 |
| 1.8 miRNA的遗传变异研究 | 第19-22页 |
| 1.8.1 miRNA的多态性 | 第20页 |
| 1.8.2 SNPs检测方法 | 第20-22页 |
| 1.8.2.1 限制性片段长度多态性 | 第20页 |
| 1.8.2.2 等位基因特异性PCR | 第20页 |
| 1.8.2.3 高分辨率熔解曲线分析 | 第20页 |
| 1.8.2.4 激光解吸附电离飞行时间质谱 | 第20-22页 |
| 2 引言 | 第22-23页 |
| 3 miR-1704组织表达规律研究 | 第23-29页 |
| 3.1 试验材料 | 第23页 |
| 3.1.1 试验样品 | 第23页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第23页 |
| 3.1.3 主要试剂及溶液配制 | 第23页 |
| 3.2 试验方法 | 第23-25页 |
| 3.2.1 总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 3.2.2 RNA质量检测 | 第24页 |
| 3.2.3 反转录合成c DNA | 第24页 |
| 3.2.4 制备c DNA混池 | 第24页 |
| 3.2.5 荧光定量PCR引物设计 | 第24-25页 |
| 3.2.6 荧光定量PCR反应 | 第25页 |
| 3.2.7 数据分析 | 第25页 |
| 3.3 结果与分析 | 第25-28页 |
| 3.3.1 总RNA质量检测 | 第25-26页 |
| 3.3.2 引物特异性检测 | 第26-27页 |
| 3.3.3 鸡miR-1704在固始鸡不同发育时期的组织表达规律 | 第27-28页 |
| 3.4 讨论 | 第28页 |
| 3.5 小结 | 第28-29页 |
| 4 miR-1704靶基因的预测及初步鉴定 | 第29-42页 |
| 4.1 试验材料 | 第29-30页 |
| 4.1.1 细胞系 | 第29页 |
| 4.1.2 载体 | 第29页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 4.1.4 主要试验试剂及溶液配制 | 第29-30页 |
| 4.2 试验方法 | 第30-35页 |
| 4.2.1 miR-1704靶基因的预测分析 | 第30页 |
| 4.2.2 候选靶序列psi CHECK-2 载体构建 | 第30-33页 |
| 4.2.2.1 候选靶序列载体构建的引物设计 | 第30-31页 |
| 4.2.2.2 PCR反应条件 | 第31页 |
| 4.2.2.3 PCR产物纯化回收 | 第31-32页 |
| 4.2.2.4 psi CHECK2质粒和目的片段的双酶切 | 第32页 |
| 4.2.2.5 psi CHECK2质粒和目的片段酶切产物的纯化回收 | 第32页 |
| 4.2.2.6 目的序列和psi CHECK-2 载体的连接 | 第32页 |
| 4.2.2.7 候选靶序列psi CHECK2重组质粒的转化及阳性克隆的筛选与鉴定 | 第32-33页 |
| 4.2.2.8 候选靶序列psi CHECK-2 重组质粒提取 | 第33页 |
| 4.2.3 细胞培养 | 第33-34页 |
| 4.2.3.1 细胞的冻存 | 第33-34页 |
| 4.2.3.2 细胞的复苏 | 第34页 |
| 4.2.3.3 细胞的传代 | 第34页 |
| 4.2.4 共转染及双荧光素酶报告基因活性检测 | 第34-35页 |
| 4.2.4.1 细胞转染 | 第34-35页 |
| 4.2.4.2 双荧光素酶报告基因活性检测 | 第35页 |
| 4.2.5 数据分析 | 第35页 |
| 4.3 结果与分析 | 第35-41页 |
| 4.3.1 miR-1704靶基因的预测分析 | 第35-39页 |
| 4.3.2 psi CHECK2载体构建 | 第39-40页 |
| 4.3.3 DF1细胞培养转染 | 第40页 |
| 4.3.4 不同靶序列与miR-1704作用验证 | 第40-41页 |
| 4.4 讨论 | 第41页 |
| 4.5 小结 | 第41-42页 |
| 5 miR-1704多态位点rs14668705（C>G）遗传效应分析 | 第42-56页 |
| 5.1 rs14668705（C>G）与固始鸡×安卡鸡F2代资源群表型性状的关联分析 | 第42-50页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第42-43页 |
| 5.1.1.1 试验动物 | 第42页 |
| 5.1.1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 5.1.1.3 主要溶液配制 | 第42-43页 |
| 5.1.2 试验方法 | 第43-45页 |
| 5.1.2.0 基因组DNA的提取 | 第43页 |
| 5.1.2.1 DNA混池构建 | 第43页 |
| 5.1.2.2 SNPs功能预测 | 第43页 |
| 5.1.2.3 PCR引物设计及内切酶的选择 | 第43-44页 |
| 5.1.2.4 PCR扩增 | 第44页 |
| 5.1.2.5 PCR产物检测 | 第44页 |
| 5.1.2.6 PCR产物的限制性酶切 | 第44页 |
| 5.1.2.7 酶切产物检测及基因型判定 | 第44页 |
| 5.1.2.8 基因频率和基因型频率 | 第44页 |
| 5.1.2.9 SNP基因型与表型性状关联分析 | 第44-45页 |
| 5.1.3 结果与分析 | 第45-50页 |
| 5.1.3.1 鸡miR-1704 SNPs检测结果 | 第45页 |
| 5.1.3.2 SNPs功能预测结果 | 第45-46页 |
| 5.1.3.3 rs14668705 C>G的酶切与测序验证 | 第46-47页 |
| 5.1.3.4 rs14668705位点基因频率和基因型频率统计 | 第47页 |
| 5.1.3.5 rs14668705位点不同基因型与相关性状的关联分析 | 第47-50页 |
| 5.2 miR-1704多态位点rs1466805(C>G)对成熟miRNA生成的作用 | 第50-54页 |
| 5.2.1 试验材料 | 第50页 |
| 5.2.1.1 载体 | 第50页 |
| 5.2.1.2 主要试验试剂 | 第50页 |
| 5.2.2 试验方法 | 第50-52页 |
| 5.2.2.1 miR-1704 rs14668705（C>G）不同基因型表达载体的构建 | 第50-52页 |
| 5.2.2.2 细胞转染 | 第52页 |
| 5.2.2.3 荧光定量PCR反应检测重组质粒转染DF1细胞后miR-1704的表达 | 第52页 |
| 5.2.2.4 数据分析 | 第52页 |
| 5.2.3 结果与分析 | 第52-54页 |
| 5.2.3.1 载体构建 | 第52-53页 |
| 5.2.3.2 重组质粒转染DF1细胞后miR-1704的表达差异 | 第53-54页 |
| 5.3 讨论 | 第54-55页 |
| 5.4 小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| ABSTRACT | 第63-64页 |
