| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| 1.1 骨肉瘤 | 第12页 |
| 1.2 肿瘤的转移和复发 | 第12-13页 |
| 1.3 肿瘤干细胞 | 第13-16页 |
| 1.3.1 肿瘤干细胞与肿瘤的发生 | 第13-15页 |
| 1.3.2 调控CSCs的分子机制 | 第15-16页 |
| 1.4 基质刚度对细胞行为的影响 | 第16-18页 |
| 1.4.1 细胞外基质 | 第16-17页 |
| 1.4.2 细胞外基质刚度对细胞行为的影响 | 第17-18页 |
| 1.5 miRNA | 第18-21页 |
| 1.5.1 miRNA概述 | 第18-19页 |
| 1.5.2 miRNA在肿瘤中的作用 | 第19-20页 |
| 1.5.3 miR-29在肿瘤中的作用 | 第20-21页 |
| 1.6 课题的提出与主要研究内容 | 第21-23页 |
| 1.6.1 论文选题依据与意义 | 第21页 |
| 1.6.2 本课题的主要研究内容 | 第21-23页 |
| 第二章 细胞外基质刚度对肿瘤细胞的影响 | 第23-46页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.2.1 细胞系 | 第23页 |
| 2.2.2 实验试剂及溶液的配制 | 第23-26页 |
| 2.2.2.1 主要实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.2.2 主要溶液的配制 | 第24-26页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-34页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第26-27页 |
| 2.3.1.1 细胞的复苏 | 第26-27页 |
| 2.3.1.2 细胞的传代与接板 | 第27页 |
| 2.3.1.3 细胞的冻存 | 第27页 |
| 2.3.2 不同刚度的基底制备 | 第27-28页 |
| 2.3.3 细胞形态分析实验 | 第28页 |
| 2.3.4 化学发光法检测细胞增殖 | 第28-29页 |
| 2.3.5 划痕实验 | 第29页 |
| 2.3.6 免疫荧光实验 | 第29-30页 |
| 2.3.7 成球实验 | 第30页 |
| 2.3.8 诱导分化实验 | 第30-31页 |
| 2.3.8.1 成骨诱导分化实验 | 第30-31页 |
| 2.3.8.2 成脂诱导分化实验 | 第31页 |
| 2.3.9 耐药性实验 | 第31-32页 |
| 2.3.9.1 细胞存活率实验 | 第31-32页 |
| 2.3.9.2 细胞内吞实验 | 第32页 |
| 2.3.10 qPCR | 第32-33页 |
| 2.3.10.1 细胞总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.10.2 合成cDNA | 第33页 |
| 2.3.10.3 荧光定量PCR反应 | 第33页 |
| 2.3.11 统计分析 | 第33-34页 |
| 2.4 实验结果 | 第34-44页 |
| 2.4.1 基质刚度对骨肉瘤细胞形态的影响 | 第34-35页 |
| 2.4.2 基质刚度对骨肉瘤细胞增殖能力的影响 | 第35页 |
| 2.4.3 基质刚度对骨肉瘤细胞迁移能力的影响 | 第35-37页 |
| 2.4.4 基质刚度对骨肉瘤细胞自我更新能力的影响 | 第37-39页 |
| 2.4.5 基质刚度对骨肉瘤细胞分化潜能的影响 | 第39-41页 |
| 2.4.5.1 基质刚度对骨肉瘤细胞成骨分化潜能的影响 | 第39-40页 |
| 2.4.5.2 基质刚度对骨肉瘤细胞成脂分化潜能的影响 | 第40-41页 |
| 2.4.6 基质刚度对骨肉瘤细胞耐药性的影响 | 第41-42页 |
| 2.4.7 基质刚度对骨肉瘤细胞CSCsmarker表达的影响 | 第42-44页 |
| 2.5 讨论 | 第44页 |
| 2.6 本章小结 | 第44-46页 |
| 第三章 细胞外基质刚度调控肿瘤细胞自我更新的分子机制 | 第46-64页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-49页 |
| 3.2.1 实验试剂及溶液的配制 | 第46-48页 |
| 3.2.2.1 主要实验试剂 | 第47页 |
| 3.2.2.2 主要溶液的配制 | 第47-48页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第48-49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-54页 |
| 3.3.1 qPCR检测miRNA的表达水平 | 第49-50页 |
| 3.3.1.1 细胞总RNA的提取 | 第49页 |
| 3.3.1.2 合成第一链cDNA | 第49页 |
| 3.3.1.3 荧光定量PCR反应 | 第49-50页 |
| 3.3.2 细胞的瞬时转染 | 第50页 |
| 3.3.3 慢病毒感染 | 第50-51页 |
| 3.3.4 成球实验 | 第51页 |
| 3.3.5 WesternBlot | 第51-54页 |
| 3.3.5.1 提取蛋白样品 | 第51-52页 |
| 3.3.5.2 BCA法测蛋白浓度 | 第52页 |
| 3.3.5.3 SDS-PAGE电泳 | 第52-53页 |
| 3.3.5.4 转膜 | 第53页 |
| 3.3.5.5 封闭 | 第53页 |
| 3.3.5.6 孵抗体 | 第53-54页 |
| 3.3.5.7 曝光 | 第54页 |
| 3.4 实验结果 | 第54-62页 |
| 3.4.1 不同基质刚度上miRNA表达的差异 | 第55-56页 |
| 3.4.2 miRNA对肿瘤细胞自我更新能力的影响 | 第56-57页 |
| 3.4.3 miR-29b-1对肿瘤细胞自我更新能力的影响 | 第57-59页 |
| 3.4.4 miR-29b-1调控肿瘤细胞自我更新能力的分子机制 | 第59-62页 |
| 3.5 讨论 | 第62-63页 |
| 3.6 本章小结 | 第63-64页 |
| 第四章 全文总结与展望 | 第64-67页 |
| 4.1 全文总结 | 第64-65页 |
| 4.2 展望 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 硕士期间取得的研究成果 | 第76页 |
