| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 多杀性巴氏杆菌病简介 | 第10页 |
| 1.2 多杀型巴氏杆菌致病机制 | 第10-11页 |
| 1.3 多杀性巴氏杆菌毒力因子 | 第11-16页 |
| 1.3.1 脂多糖(LPS) | 第11-12页 |
| 1.3.2 荚膜(Capsule) | 第12-13页 |
| 1.3.3 多杀性巴氏杆菌毒素(PasteurellamultocidaToxin,PMT) | 第13-14页 |
| 1.3.4 粘附因子(Adhesins) | 第14-15页 |
| 1.3.5 外膜蛋白和孔蛋白(OuterMembraneProteinsandPorins) | 第15页 |
| 1.3.6 铁调节与摄取相关蛋白(Ironregulatedandironacquisitionproteins) | 第15-16页 |
| 1.4 先天性免疫(innateimmunesystem) | 第16-19页 |
| 1.4.1 Toll样受体(Tolllikereceptors,TLRs) | 第16-18页 |
| 1.4.2 TLRs的信号传导途径 | 第18-19页 |
| 1.5 MAPK信号通路 | 第19-21页 |
| 1.6 NF-κB信号通路 | 第21页 |
| 1.7 研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 菌株和动物 | 第22页 |
| 2.1.2 主要设备和仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要试剂耗材 | 第23页 |
| 2.1.4 实验试剂配置 | 第23-24页 |
| 2.2 建立检测ChTLRs、信号传导分子和炎性细胞因子荧光检测方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.2.2 脾脏总RNA提取及反转录 | 第25-26页 |
| 2.2.3 鸡TLRs、信号传导分子和炎性细胞因子PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.4 PCR产物的回收与克隆 | 第27-28页 |
| 2.2.5 重组质粒的鉴定与测序 | 第28-29页 |
| 2.2.6 鸡TLRs、信号传导分子和炎性细胞因子实时荧光定量PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.3 C48-1激活HD11细胞的Toll样受体分析 | 第30-32页 |
| 2.3.1 HD11巨噬细胞系培养 | 第30页 |
| 2.3.2 多杀性巴氏杆菌C48-1培养和计数 | 第30页 |
| 2.3.3 C48-1感染HD11细胞 | 第30-31页 |
| 2.3.4 C48-1感染雏鸡 | 第31-32页 |
| 2.3.5 荧光定量PCR检测体内和体外实验ChTLRs的表达量 | 第32页 |
| 2.4 TLR15对下游信号分子和炎性细胞因子的影响 | 第32-34页 |
| 2.4.1 设计并合成TLR15siRNA | 第32页 |
| 2.4.2 siRNA对HD11细胞表达ChTLR15的影响 | 第32-33页 |
| 2.4.3 siRNA对C48-1激活的HDll细胞免疫反应的影响 | 第33-34页 |
| 2.5 C48-1激活HD11细胞的MAPK及NF-κB信号通路研究 | 第34-36页 |
| 2.5.1 C48-1对MAPK家族和NF-κB通路的活化 | 第34-35页 |
| 2.5.2 蛋白抑制剂对C48-1诱导的HD11细胞活化的影响 | 第35页 |
| 2.5.3 蛋白抑制剂对C48-1诱导的HD11细胞免疫反应的影晌 | 第35-36页 |
| 3 试验结果 | 第36-58页 |
| 3.1 建立TLRs、信号传导分子和炎性细胞因子荧光定量检测方法 | 第36-45页 |
| 3.1.1 鸡TLRs、信号传导分子和炎性细胞因子PCR扩增结果 | 第36-37页 |
| 3.1.2 标准曲线的制作 | 第37-40页 |
| 3.1.3 特异性试验结果 | 第40-42页 |
| 3.1.4 敏感性试验结果 | 第42-43页 |
| 3.1.5 重复性试验结果 | 第43-45页 |
| 3.2 C48-1激活HD11细胞的Toll样受体分析 | 第45-48页 |
| 3.2.1 多杀性巴氏杆菌C48-1计数结果 | 第45页 |
| 3.2.2 C48-1感染HD11后细胞中各ChTLRs表达情况 | 第45-46页 |
| 3.2.3 C48-1感染雏鸡后脾脏、肝脏中各ChTLRs表达情况 | 第46-48页 |
| 3.3 TLR15对下游信号分子和炎性细胞因子的影响 | 第48-51页 |
| 3.3.1 siRNA对HD11细胞表达ChTLR15的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.2 siRNA对C48-1激活的HDll细胞免疫反应的影响 | 第49-51页 |
| 3.4 C48-1对MAPK家族和NF-κB通路的活化 | 第51-52页 |
| 3.4.1 C48-1对MAPK家族各通路的活化 | 第51页 |
| 3.4.2 C48-1对NF-κB通路的活化 | 第51-52页 |
| 3.5 C48-1感染后MAPK家族和NF-κB通路对炎性细胞因子调控作用 | 第52-56页 |
| 3.5.1 特异性抑制剂对C48-1诱导的HD11细胞活化的影响 | 第52-53页 |
| 3.5.2 蛋白抑制剂对C48-1诱导的HD11细胞免疫反应的影晌 | 第53-56页 |
| 3.6 结论与讨论 | 第56-58页 |
| 3.6.1 建立ChTLRs、信号传导分子、炎性细胞因子荧光检测方法 | 第56页 |
| 3.6.2 ChTLR15为识别C48-1的关键Toll样受体 | 第56-57页 |
| 3.6.3 ChTLR15可以经过MyD88依赖途径,激活信号传导分子TRAF6和NF-κB,促进炎性细胞因子释放 | 第57页 |
| 3.6.4 C48-1激活NF-κB和MAPK信号通路释放炎性细胞因子 | 第57-58页 |
| 4 研究总结 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 个人简介 | 第68-69页 |
