| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-29页 |
| 1.1 Hedgehog 信号通路研究背景 | 第12-26页 |
| 1.1.1 Hedgehog 信号通路的组成及转导途径 | 第13-19页 |
| 1.1.2 Hedgehog 信号通路与纤毛 | 第19-21页 |
| 1.1.3 Hedgehog 信号通路与疾病 | 第21-23页 |
| 1.1.4 Hedgehog 信号通路中 Fused 蛋白 | 第23-24页 |
| 1.1.5 Hedgehog 信号通路中 SUFU 蛋白 | 第24-26页 |
| 1.2 与 Hh 信号通路相关的蛋白 SAP18 | 第26-27页 |
| 1.3 结构生物学 | 第27-28页 |
| 1.3.1 蛋白质晶体学 | 第27-28页 |
| 1.4 本实验的研究内容及目的意义 | 第28-29页 |
| 第二章 实验材料、试剂与方法 | 第29-52页 |
| 2.1 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第30-33页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.2 菌株与细胞系 | 第31页 |
| 2.2.3 载体 | 第31-32页 |
| 2.2.4 基因 | 第32页 |
| 2.2.5 实验所用引物 | 第32-33页 |
| 2.3 主要试剂和溶液配制 | 第33-36页 |
| 2.3.1 培养基配制 | 第33页 |
| 2.3.2 常用溶液配制 | 第33-36页 |
| 2.4 实验方法及步骤 | 第36-52页 |
| 2.4.1 PCR 引物设计 | 第36-37页 |
| 2.4.2 PCR 反应 | 第37-38页 |
| 2.4.3 限制性内切酶酶切与 DNA 连接反应 | 第38-40页 |
| 2.4.4 LIC 克隆方法 | 第40页 |
| 2.4.5 DNA 凝胶电泳 | 第40页 |
| 2.4.6 DNA 回收 | 第40-41页 |
| 2.4.7 质粒抽提 | 第41页 |
| 2.4.8 转化大肠杆菌感受态细胞 | 第41页 |
| 2.4.9 原核表达测试 | 第41-42页 |
| 2.4.10 蛋白质大规模原核表达 | 第42页 |
| 2.4.11 昆虫细胞系的培养与维持 | 第42-43页 |
| 2.4.12 重组杆状病毒基因组的制备与检测 | 第43-44页 |
| 2.4.13 重组杆状病毒的制备、扩增及重组蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 2.4.14 蛋白质亲和层析纯化（重力柱） | 第45-46页 |
| 2.4.15 蛋白质分子筛层析纯化 | 第46-48页 |
| 2.4.16 Native-PAGE 分析方法 | 第48-49页 |
| 2.4.17 蛋白质浓度测定（Bradford 法） | 第49页 |
| 2.4.18 蛋白质浓缩 | 第49页 |
| 2.4.19 蛋白质限制性酶切实验 | 第49-50页 |
| 2.4.20 测序 | 第50页 |
| 2.4.21 蛋白质结晶 | 第50-51页 |
| 2.4.22 蛋白质序列生物信息学分析 | 第51-52页 |
| 第三章 实验结果 | 第52-79页 |
| 3.1 HSUFU 蛋白质序列的生物信息学分析 | 第52-54页 |
| 3.1.1 HSUFU 蛋白质序列比对分析 | 第52-53页 |
| 3.1.2 HSUFU 蛋白质序列的折叠倾向预测 | 第53-54页 |
| 3.2 Fused 蛋白质序列的生物信息学分析 | 第54-56页 |
| 3.2.1 Fused 蛋白质序列比对分析 | 第54页 |
| 3.2.2 Fused 蛋白质序列的折叠倾向预测 | 第54-56页 |
| 3.3 HSUFU 和 SAP18 蛋白质的原核表达、纯化 | 第56-63页 |
| 3.3.1 原核表达载体构建 | 第56-58页 |
| 3.3.2 SUFU 蛋白的原核表达与纯化 | 第58-63页 |
| 3.4 HSUFU-HSAP18 蛋白复合物的结晶 | 第63-65页 |
| 3.4.1 HSUFU-HSAP18 蛋白质结晶条件的初筛 | 第63-64页 |
| 3.4.2 HSUFU-HSAP18 蛋白复合物晶体的优化 | 第64-65页 |
| 3.5 小结 | 第65-66页 |
| 3.6 Fused 构建、表达和纯化 | 第66-73页 |
| 3.6.1 Fused 蛋白质的真核表达载体的构建 | 第66-67页 |
| 3.6.2 Fused 蛋白质的真核核表达与纯化 | 第67-69页 |
| 3.6.3 Fused 原核表达载体的构建 | 第69-73页 |
| 3.7 小结 | 第73-75页 |
| 3.8 Fused 和 SUFU 复合物构建、表达和纯化 | 第75-77页 |
| 3.8.1 Fused 和 SUFU 原核表达载体的构建 | 第75页 |
| 3.8.2 Fused 和 SUFU 蛋白的表达和纯化 | 第75-77页 |
| 3.9 小结 | 第77-79页 |
| 第四章 结论 | 第79-80页 |
| 第五章 总结与展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-86页 |
| 附录一 | 第86-88页 |
| 附录二 | 第88-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第95页 |
