| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 中英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-27页 |
| 1.1 乙酰化的发现及发展历程 | 第14-17页 |
| 1.1.1 蛋白乙酰化在真核中广泛存在 | 第14-15页 |
| 1.1.2 蛋白质乙酰化在原核中广泛存在 | 第15-17页 |
| 1.2 重要功能的原核乙酰化蛋白质举例 | 第17-18页 |
| 1.3 结合乙酰化的结构域、乙酰化与其他修饰的关系 | 第18-19页 |
| 1.4 原核生物乙酰化酶和去乙酰化酶以及酶与底物的研究 | 第19-20页 |
| 1.5 质谱背景 | 第20-22页 |
| 1.5.1 新技术和方法的改进用于乙酰化研究 | 第20-22页 |
| 1.6. Red 重组敲除系统 | 第22-24页 |
| 1.7 SILAC 背景 | 第24-26页 |
| 本课题研究目标 | 第26-27页 |
| 第二章 YcgC、CobB 过表达和敲除菌株的构建 | 第27-43页 |
| 2.1 本章概述 | 第27页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第27-29页 |
| 2.2.0 实验菌株及质粒 | 第27-28页 |
| 2.2.1 仪器与试剂 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.3.1 过表达菌株的构建 | 第29-31页 |
| 2.3.2 敲除菌株的构建 | 第31-35页 |
| 2.3.3 pCA24N 载体的构建 | 第35-37页 |
| 2.4 结果及分析 | 第37-42页 |
| 2.4.1 过表达菌株的构建 | 第37-38页 |
| 2.4.2 敲除菌株的构建 | 第38-40页 |
| 2.4.3 pCA24N 载体的构建 | 第40-42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-43页 |
| 第三章 定量质谱发现 YcgC 的底物 | 第43-55页 |
| 3.1 本章概述 | 第43页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第43-44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-49页 |
| 3.3.1 △lysA 菌株的验证和 YcgC、CobB 的诱导表达 | 第44-45页 |
| 3.3.2 葡萄糖浓度和诱导时间的优化 | 第45-46页 |
| 3.3.3 标记率的检测 | 第46-47页 |
| 3.3.4 质谱实验 | 第47-48页 |
| 3.3.5 用质谱数据的分析 | 第48-49页 |
| 3.4 结果及分析 | 第49-54页 |
| 3.4.1 敲除菌的验证和蛋白表达 | 第49-53页 |
| 3.4.1.1 △lysA 敲除的验证 | 第49页 |
| 3.4.1.2 YcgC 和 CobB 的诱导表达以及菌落整体乙酰化的变化 | 第49-51页 |
| 3.4.1.3 菌株在 M9 培养基中的生长情况 | 第51-52页 |
| 3.4.1.4 合适的葡糖糖浓度和诱导时间 | 第52-53页 |
| 3.4.3 标记率的检测 | 第53页 |
| 3.4.4 质谱实验结果 | 第53-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 利用芯片寻找与 YcgC 相互作用的蛋白 | 第55-63页 |
| 4.1 本章概述 | 第55页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第55-56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-58页 |
| 4.3.1 芯片的制备 | 第56页 |
| 4.3.2 大肠杆菌蛋白芯片实验 | 第56-57页 |
| 4.3.2.1 YcgC 蛋白的纯化 | 第56-57页 |
| 4.3.2.2 YcgC 的生物素标记 | 第57页 |
| 4.3.3 PPI（protein-protein interaction）实验 | 第57页 |
| 4.3.4 芯片数据分析 | 第57-58页 |
| 4.4 结果及分析 | 第58-62页 |
| 4.4.1 YcgC 纯化 | 第58-59页 |
| 4.4.2 芯片结果 | 第59页 |
| 4.4.3 芯片数据分析 | 第59-62页 |
| 4.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 总结与展望 | 第63-66页 |
| 研究成果 | 第63页 |
| 正在进行的实验 | 第63-64页 |
| 下一步的工作计划及展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附录 I 缓冲液信息 | 第71-74页 |
| 附录Ⅱ 仪器信息 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第75页 |
