| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 英文缩略表 | 第11-13页 |
| 1 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 问题的提出及研究意义 | 第13-14页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第14-21页 |
| 1.2.1 哺乳动物宿主细胞大规模培养具有重要意义 | 第14-17页 |
| 1.2.2 提高宿主细胞应激耐受力的研究现状 | 第17-20页 |
| 1.2.3 MGF 是一种应激响应分子 | 第20-21页 |
| 1.3 主要研究内容与技术方案 | 第21-25页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第21页 |
| 1.3.2 技术方案 | 第21-23页 |
| 1.3.3 本研究的主要创新点 | 第23-25页 |
| 2 重组表达 MGFCHO-K1 稳定细胞株的构建与验证 | 第25-43页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第25-33页 |
| 2.2.1 实验试剂、材料及主要仪器设备 | 第25-27页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第27-28页 |
| 2.2.3 重组慢病毒的构建 | 第28-30页 |
| 2.2.4 重组 CHO 细胞株的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.5 细胞株鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.6 统计学分析 | 第32-33页 |
| 2.3 实验结果 | 第33-40页 |
| 2.3.1 重组慢病毒的构建 | 第33-37页 |
| 2.3.2 重组 CH0-K1 稳定宿主细胞株的构建 | 第37-40页 |
| 2.3.3 Western blot 验证 | 第40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-43页 |
| 3 MGF 重组 CHO 细胞无血清培养耐受力的研究 | 第43-53页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 材料与方法 | 第43-45页 |
| 3.2.1 试剂仪器 | 第43-44页 |
| 3.2.2 细胞培养 | 第44页 |
| 3.2.3 MTT 法测细胞增殖 | 第44页 |
| 3.2.4 流式细胞仪测细胞周期 | 第44页 |
| 3.2.5 流式细胞仪测细胞凋亡 | 第44-45页 |
| 3.2.6 台盼蓝排斥实验 | 第45页 |
| 3.2.7 葡萄糖的消耗与乳酸的积累测定实验 | 第45页 |
| 3.2.8 统计学分析 | 第45页 |
| 3.3 实验结果 | 第45-50页 |
| 3.3.1 MTT 法测细胞增殖 | 第45-46页 |
| 3.3.2 流式细胞仪测细胞周期 | 第46-47页 |
| 3.3.3 流式细胞仪测细胞凋亡 | 第47-48页 |
| 3.3.4 台盼蓝排斥实验 | 第48-49页 |
| 3.3.5 葡萄糖的消耗与乳酸的积累测定 | 第49-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-51页 |
| 3.5 小结 | 第51-53页 |
| 4 MGF 重组 CHO 细胞 spent medium 培养耐受力的研究 | 第53-63页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第53-54页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第53页 |
| 4.2.2 spent medium 的制备 | 第53页 |
| 4.2.3 spent medium 诱导细胞凋亡时间的确定 | 第53页 |
| 4.2.4 MTT 法测定细胞增殖 | 第53页 |
| 4.2.5 流式细胞仪测细胞周期 | 第53页 |
| 4.2.6 流式细胞仪测细胞凋亡 | 第53-54页 |
| 4.2.7 台盘蓝排斥实验 | 第54页 |
| 4.2.8 葡萄糖消耗量与乳酸积累量的测定 | 第54页 |
| 4.2.9 统计学分析 | 第54页 |
| 4.3 实验结果 | 第54-59页 |
| 4.3.0 spent medium 的制备 | 第54页 |
| 4.3.1 MTT 法测细胞增殖 | 第54-55页 |
| 4.3.2 流式细胞仪测细胞周期 | 第55-56页 |
| 4.3.3 流式细胞仪测细胞凋亡 | 第56-57页 |
| 4.3.4 台盼蓝排斥实验 | 第57-58页 |
| 4.3.5 葡萄糖消耗与乳酸积累 | 第58-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-60页 |
| 4.5 本章小结 | 第60-63页 |
| 5 MGF 重组 CHO 细胞酸碱培养基培养耐受力的研究 | 第63-75页 |
| 5.1 引言 | 第63页 |
| 5.2 材料与方法 | 第63-64页 |
| 5.2.1 材料 | 第63页 |
| 5.2.2 不同 pH 的培养液制备及细胞培养 | 第63-64页 |
| 5.2.3 酸碱环境下 MTT 实验 | 第64页 |
| 5.2.4 流式细胞仪测细胞周期 | 第64页 |
| 5.2.5 流式细胞仪测细胞凋亡 | 第64页 |
| 5.2.6 台盼蓝排斥实验 | 第64页 |
| 5.2.7 酸碱环境下葡萄糖的消耗与乳酸的积累 | 第64页 |
| 5.2.8 统计学分析 | 第64页 |
| 5.3 结果 | 第64-72页 |
| 5.3.1 不同 pH 的培养基对细胞增殖的影响 | 第64-65页 |
| 5.3.2 酸碱对细胞增殖的影响 | 第65-66页 |
| 5.3.3 酸碱对细胞周期的影响 | 第66-68页 |
| 5.3.4 酸碱对细胞凋亡的影响 | 第68-70页 |
| 5.3.5 酸碱下的台盼蓝实验 | 第70-71页 |
| 5.3.6 酸碱下葡萄糖的消耗与乳酸的积累的测定 | 第71-72页 |
| 5.4 讨论 | 第72-73页 |
| 5.5 本章小结 | 第73-75页 |
| 6 结论与展望 | 第75-77页 |
| 6.1 主要结论 | 第75-76页 |
| 6.2 未来工作展望 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-83页 |
| 附录 | 第83页 |
| A. 作者在攻读学位期间发表的论文目录 | 第83页 |
| B. 作者在攻读学位期间取得的科研成果目录 | 第83页 |
| C 作者在攻读学位期间参与项目 | 第83页 |
