摘要 | 第3-4页 |
ABSTRACT | 第4-5页 |
第一章 前言 | 第9-15页 |
LITAF 的发现 | 第10-11页 |
LITAF 的信号通路研究进展 | 第11-13页 |
LITAF 与相关医学研究 | 第13-14页 |
LITAF 在水生动物的研究 | 第14页 |
本论文研究的目的和意义 | 第14-15页 |
第二章 材料和方法 | 第15-30页 |
2.1 仪器与试剂 | 第15-16页 |
2.1.1 主要仪器设备 | 第15页 |
2.1.2 主要试剂与试剂盒 | 第15-16页 |
2.1.3 载体与菌种 | 第16页 |
2.2 实验材料 | 第16-17页 |
2.3 相关软件 | 第17页 |
2.4 实验方法 | 第17-30页 |
2.4.1 池蝶蚌 LITAF 基因的克隆 | 第17-21页 |
2.4.1.1 SMART cDNA 的合成 | 第17-19页 |
2.4.1.2 池蝶蚌 LITAF 开放阅读框(HsLITAF-ORF)的克隆 | 第19-20页 |
2.4.1.3 感受态细胞的制备 | 第20页 |
2.4.1.4 连接产物转化感受态细胞 | 第20-21页 |
2.4.1.5 菌液 PCR | 第21页 |
2.4.2 池蝶蚌 LITAF 开放阅读框序列在基因组上的结构 | 第21-22页 |
2.4.2.1 池蝶蚌基因组 DNA 的提取 | 第21-22页 |
2.4.3 细胞培养 | 第22-23页 |
2.4.3.1 细胞复苏 | 第22页 |
2.4.3.2 细胞传代培养 | 第22-23页 |
2.4.3.3 细胞冻存 | 第23页 |
2.4.3.4 细胞计数 | 第23页 |
2.4.4 实时荧光定量 PCR 分析 | 第23-25页 |
2.4.4.1 池蝶蚌 LITAF 基因在不同组织的表达 | 第23-24页 |
2.4.4.2 LPS 刺激后 LITAF 基因的表达 | 第24页 |
2.4.4.4 Hela 细胞凋亡相关基因的表达 | 第24页 |
2.4.4.5 实时荧光定量 PCR | 第24-25页 |
2.4.5 池蝶蚌 LITAF 基因的凋亡功能分析 | 第25-30页 |
2.4.5.1 LITAF 真核表达载体的构建 | 第25-27页 |
2.4.5.2 LITAF 真核重组质粒 DNA 的提取 | 第27-28页 |
2.4.5.3 瞬时转染 | 第28页 |
2.4.5.4 流式细胞仪分析 | 第28页 |
2.4.5.5 Hela 细胞凋亡相关基因的表达变化分析 | 第28-30页 |
第三章 实验结果 | 第30-42页 |
3.1 池蝶蚌总 RNA 的提取 | 第30页 |
3.2 LITAFcDNA 的完整的 ORF 序列及推导的氨基酸序列 | 第30-36页 |
3.2.1 LITAF1 和 LITAF2 的碱基和氨基酸序列的比较 | 第32-35页 |
3.2.2 推导的 LITAF1 氨基酸序列的同源性比较 | 第35页 |
3.2.3 LITAF 基因的系统进化树 | 第35-36页 |
3.3 池蝶蚌 LITAF ORF 框序列的基因组序列 | 第36-37页 |
3.4 池蝶蚌 LITAF 基因的定量表达 | 第37-38页 |
3.4.1 池蝶蚌 LITAF 基因的组织表达 | 第37页 |
3.4.2 LPS 和 PBS 刺激后 LITAF 在血淋巴中的表达变化 | 第37-38页 |
3.5 流式细胞仪检测 HsLITAF 诱导的细胞凋亡变化 | 第38-39页 |
3.6 荧光定量检测 Hela 细胞凋亡相关基因的表达 | 第39-42页 |
第四章 讨论 | 第42-46页 |
致谢 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-52页 |
附录:中英文翻译对照 | 第52-54页 |
攻读学位期间的研究成果 | 第54页 |