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池蝶蚌脂多糖诱导的肿瘤坏死因子LITAF基因的克隆及对Hela细胞的凋亡效应

摘要第3-4页
ABSTRACT第4-5页
第一章 前言第9-15页
    LITAF 的发现第10-11页
    LITAF 的信号通路研究进展第11-13页
    LITAF 与相关医学研究第13-14页
    LITAF 在水生动物的研究第14页
    本论文研究的目的和意义第14-15页
第二章 材料和方法第15-30页
    2.1 仪器与试剂第15-16页
        2.1.1 主要仪器设备第15页
        2.1.2 主要试剂与试剂盒第15-16页
        2.1.3 载体与菌种第16页
    2.2 实验材料第16-17页
    2.3 相关软件第17页
    2.4 实验方法第17-30页
        2.4.1 池蝶蚌 LITAF 基因的克隆第17-21页
            2.4.1.1 SMART cDNA 的合成第17-19页
            2.4.1.2 池蝶蚌 LITAF 开放阅读框(HsLITAF-ORF)的克隆第19-20页
            2.4.1.3 感受态细胞的制备第20页
            2.4.1.4 连接产物转化感受态细胞第20-21页
            2.4.1.5 菌液 PCR第21页
        2.4.2 池蝶蚌 LITAF 开放阅读框序列在基因组上的结构第21-22页
            2.4.2.1 池蝶蚌基因组 DNA 的提取第21-22页
        2.4.3 细胞培养第22-23页
            2.4.3.1 细胞复苏第22页
            2.4.3.2 细胞传代培养第22-23页
            2.4.3.3 细胞冻存第23页
            2.4.3.4 细胞计数第23页
        2.4.4 实时荧光定量 PCR 分析第23-25页
            2.4.4.1 池蝶蚌 LITAF 基因在不同组织的表达第23-24页
            2.4.4.2 LPS 刺激后 LITAF 基因的表达第24页
            2.4.4.4 Hela 细胞凋亡相关基因的表达第24页
            2.4.4.5 实时荧光定量 PCR第24-25页
        2.4.5 池蝶蚌 LITAF 基因的凋亡功能分析第25-30页
            2.4.5.1 LITAF 真核表达载体的构建第25-27页
            2.4.5.2 LITAF 真核重组质粒 DNA 的提取第27-28页
            2.4.5.3 瞬时转染第28页
            2.4.5.4 流式细胞仪分析第28页
            2.4.5.5 Hela 细胞凋亡相关基因的表达变化分析第28-30页
第三章 实验结果第30-42页
    3.1 池蝶蚌总 RNA 的提取第30页
    3.2 LITAFcDNA 的完整的 ORF 序列及推导的氨基酸序列第30-36页
        3.2.1 LITAF1 和 LITAF2 的碱基和氨基酸序列的比较第32-35页
        3.2.2 推导的 LITAF1 氨基酸序列的同源性比较第35页
        3.2.3 LITAF 基因的系统进化树第35-36页
    3.3 池蝶蚌 LITAF ORF 框序列的基因组序列第36-37页
    3.4 池蝶蚌 LITAF 基因的定量表达第37-38页
        3.4.1 池蝶蚌 LITAF 基因的组织表达第37页
        3.4.2 LPS 和 PBS 刺激后 LITAF 在血淋巴中的表达变化第37-38页
    3.5 流式细胞仪检测 HsLITAF 诱导的细胞凋亡变化第38-39页
    3.6 荧光定量检测 Hela 细胞凋亡相关基因的表达第39-42页
第四章 讨论第42-46页
致谢第46-47页
参考文献第47-52页
附录:中英文翻译对照第52-54页
攻读学位期间的研究成果第54页

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