| 个人简历 | 第3-8页 |
| 摘要 | 第8-13页 |
| ABSTRACT | 第13-18页 |
| 前言 | 第20-25页 |
| 第一部分 程序性坏死参与了染锰SK-N-SH细胞死亡 | 第25-48页 |
| 1 材料 | 第25-29页 |
| 1.1 细胞株 | 第25页 |
| 1.2 主要试剂及耗材 | 第25-26页 |
| 1.3 主要仪器 | 第26-29页 |
| 2 实验步骤 | 第29-34页 |
| 2.1 MTT法检测染锰SK-N-SH细胞存活率 | 第29-31页 |
| 2.2 MTT法检测zVAD-fmk、Nec-1干预染锰SK-N-SH细胞的存活率 | 第31页 |
| 2.3 流式细胞术检测zVAD-fmk、Nec-1干预后染锰SK-N-SH细胞凋亡及坏死 | 第31-32页 |
| 2.4 Westernblot法检测zVAD-fmk、Nec-1干预染锰SK-N-SH细胞的RIP3蛋白表达量 | 第32-34页 |
| 2.5 SK-N-SH细胞内ROS测定 | 第34页 |
| 2.6 统计学分析 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-42页 |
| 3.1 SK-N-SH细胞存活率随着染锰浓度增高而降低 | 第34-36页 |
| 3.2 程序性坏死抑制剂Nec-1可升高染锰SK-N-SH细胞存活率 | 第36-38页 |
| 3.3 zVAD-fmk、Nec-1对染锰SK-N-SH细胞凋亡和坏死的影响 | 第38-40页 |
| 3.4 zVAD-fmk及Nec-1对染锰SK-N-SH细胞的RIP3蛋白表达量的影响 | 第40-41页 |
| 3.5 zVAD-fmk、nec-1对染锰SK-N-SH细胞内平均活性氧水平(ROS)的影响 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-48页 |
| 第二部分 染锰SK-N-SH细胞的程序性坏死由RIP3介导 | 第48-74页 |
| 1 实验材料 | 第48-51页 |
| 1.1 DNA模版、引物及质粒载体 | 第48-49页 |
| 1.2 主要试剂 | 第49-50页 |
| 1.3 主要仪器 | 第50页 |
| 1.4 试剂配制 | 第50-51页 |
| 2 实验方法及步骤 | 第51-60页 |
| 2.1 人慢病毒RIP3RNAi载体的构建和鉴定 | 第51-56页 |
| 2.2 慢病毒颗粒的制备 | 第56页 |
| 2.3 SK-N-SH细胞转染效率评价 | 第56-57页 |
| 2.4 SK-N-SH细胞最小致死浓度筛选 | 第57页 |
| 2.5 RIP3-shRNA慢病毒转染SK-N-SH细胞 | 第57-59页 |
| 2.6 MTT法检测染锰后RIP3-RNAiSK-N-SH细胞存活率 | 第59-60页 |
| 2.8 WB检测染锰后各组RIP3蛋白表达量和MLKL磷酸化水平变化 | 第60页 |
| 2.9 统计学分析 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-71页 |
| 3.1 LV-RIP3-shRNA载体质粒的酶切鉴定结果 | 第60-61页 |
| 3.2 重组质粒的测序鉴定结果 | 第61页 |
| 3.3 SK-N-SH细胞病毒转染效率评价结果 | 第61-62页 |
| 3.4 SK-N-SH细胞最小致死浓度筛选结果 | 第62-64页 |
| 3.5 不同RIP3-shRNA病毒转染SK-N-SH细胞效率 | 第64-65页 |
| 3.6 RNA提取质量检测 | 第65页 |
| 3.7 RT-PCR检测不同shRNA序列干扰细胞RIP3mRNA表达量结果 | 第65-66页 |
| 3.8 WesternBlot检测不同shRNA序列干扰细胞RIP3蛋白表达量结果 | 第66-67页 |
| 3.9 染锰对RIP3-RNAiSK-N-SH细胞存活率的影响 | 第67-68页 |
| 3.10 流式细胞术检测染锰对RIP3-RNAiSK-N-SH细胞死亡的影响.. | 第68-69页 |
| 3.11 锰暴露对RIP3-KD细胞RIP3蛋白表达量及MLKL磷酸化水平的影响 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| 第三部分 Nec-1对于亚急性锰暴露所诱导的大鼠神经元死亡的保护作用. | 第74-91页 |
| 1 实验材料 | 第74-76页 |
| 1.1 动物及饲养条件 | 第74-75页 |
| 1.2 主要试剂及耗材 | 第75-76页 |
| 1.3 实验仪器 | 第76页 |
| 2 实验方法及步骤 | 第76-81页 |
| 2.1 实验动物侧脑室埋管及分组 | 第76-77页 |
| 2.2 动物染锰及侧脑室注射给药 | 第77页 |
| 2.3 大鼠体重和一般情况记录 | 第77页 |
| 2.4 免疫组织化学法检测脑黑质TH阳性细胞及海马GFAP阳性细胞 | 第77-79页 |
| 2.5 透射电镜超薄切片制作及观察 | 第79-80页 |
| 2.6 PCR荧光定量法检测RIP3、Bcl2、Caspase3、NOX2、NOX4基因的表达 | 第80-81页 |
| 2.7 统计学分析 | 第81页 |
| 3 结果 | 第81-87页 |
| 3.1 Nec-1对亚急性锰暴露大鼠黑质核团TH阳性细胞的影响 | 第81-83页 |
| 3.2 Nec-1对亚急性锰暴露大鼠黑质核团凋亡及坏死相关基因表达的影响 | 第83页 |
| 3.3 Nec-1对亚急性锰暴露大鼠海马CA1区GFAP阳性细胞的影响 | 第83-85页 |
| 3.4 Nec-1干预对亚急性锰暴露大鼠海马超微结构的影响 | 第85-87页 |
| 4 讨论 | 第87-91页 |
| 小结 | 第91页 |
| 展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-102页 |
| 附录I 英文缩略词表 | 第102-108页 |
| 综述：锰的神经毒性与可调控性细胞死亡 | 第108-145页 |
| 综述参考文献 | 第122-145页 |
| 致谢 | 第145-146页 |
| 在读期间发表(或待发表)的文章 | 第146-147页 |
