中文摘要 | 第5-6页 |
英文摘要 | 第6-7页 |
符号说明 | 第10-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-37页 |
1.1 聚醚类抗生素的研究进展 | 第13-16页 |
1.1.1 聚醚类抗生素应用价值 | 第13-16页 |
1.2 聚醚类抗生素环氧化酶催化功能的研究 | 第16-19页 |
1.3 聚醚类抗生素环氧键水解酶催化功能的研究 | 第19-20页 |
1.4 聚醚类抗生素的生物合成基因簇 | 第20-28页 |
1.4.1 莫能霉素(monensin)生物合成基因簇 | 第20-23页 |
1.4.2 南昌霉素(nanchangmycin)生物合成基因簇 | 第23-25页 |
1.4.3 尼日利亚菌素(nigericin)生物合成基因簇 | 第25-26页 |
1.4.4 拉沙里菌素(lasalocid)生物合成基因簇 | 第26-27页 |
1.4.5 盐霉素(salinomycin)生物合成基因簇 | 第27-28页 |
1.5 抗生素基因簇资源挖掘方法 | 第28-37页 |
第二章 材料与方法 | 第37-51页 |
2.1 实验材料 | 第37-41页 |
2.1.1 菌株及质粒 | 第37-39页 |
2.1.2 培养基与化学试剂 | 第39-41页 |
2.2 实验方法 | 第41-51页 |
2.2.1 链霉菌培养及菌种保藏[66] | 第41页 |
2.2.2 链霉菌DNA 的大量提取 | 第41-42页 |
2.2.3 链霉菌质粒DNA 的小量提取 | 第42页 |
2.2.4 大肠杆菌质粒质粒DNA 的提取 | 第42-43页 |
2.2.5 链霉菌总DNA 的少量快速提取 | 第43页 |
2.2.6 DNA 片段的回收 | 第43页 |
2.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
2.2.8 质粒对大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第44页 |
2.2.9 高压电击法大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第44页 |
2.2.10 高压电击法转化大肠杆菌 | 第44-45页 |
2.2.11 链霉菌DNA 文库构建 | 第45-48页 |
2.2.12 DNA 文库的筛选 | 第48页 |
2.2.13 两亲本介导的质粒DNA 的跨属接合转移及验证 | 第48-49页 |
2.2.14 拉沙里菌素的生物学活性测定 | 第49页 |
2.2.15 拉沙里菌素以及衍生物的快速提取 | 第49-50页 |
2.2.16 利用HPLC-MS 对拉沙里菌素以及衍生物进行检测分析 | 第50页 |
2.2.17 生物信息学分析 | 第50-51页 |
第三章 聚醚类抗生素资源挖掘方法的研究 | 第51-76页 |
3.1 前言 | 第51-55页 |
3.2 结果与讨论 | 第55-75页 |
3.2.1 简并引物的设计 | 第55-56页 |
3.2.2 引物条件的优化及对环氧化酶基因的扩增 | 第56-61页 |
3.2.3 对已知环氧化酶基因和环氧化酶类似基因序列的分析 | 第61页 |
3.2.4 环氧化酶系统进化树及与结构对应关系 | 第61-66页 |
3.2.5 区分两类环氧化酶基因的引物优化 | 第66-69页 |
3.2.6 对未知菌株库的筛选 | 第69-72页 |
3.2.7 对BL580△产生菌的中断实验 | 第72-75页 |
3.3 总结 | 第75-76页 |
第四章 盐霉素生物合成基因簇的克隆研究 | 第76-90页 |
4.1 前言 | 第76页 |
4.2 结果与分析 | 第76-89页 |
4.2.1 盐霉素基因簇的筛选 | 第76-78页 |
4.2.2 盐霉素基因簇阳性Cosmid 37F1 的序列分析 | 第78-84页 |
4.2.3 另一个可能的盐霉素基因簇 | 第84-88页 |
4.2.4 大片段缺失实验 | 第88-89页 |
4.3 总结 | 第89-90页 |
第五章 拉沙里菌素生物合成基因簇的克隆研究 | 第90-96页 |
5.1 前言 | 第90-91页 |
5.2 结果与分析 | 第91-95页 |
5.2.1 拉沙里菌素基因簇的筛选 | 第91-93页 |
5.2.2 单交换验证拉沙里菌素基因簇 | 第93-95页 |
5.3 总结 | 第95-96页 |
第六章 总结与展望 | 第96-98页 |
6.1 本研究工作总结与主要创新点 | 第96页 |
6.2 聚醚类抗生素下一阶段研究工作展望 | 第96-98页 |
参考文献 | 第98-103页 |
致谢 | 第103-104页 |
攻读硕士学位期间发表学术论文 | 第104-107页 |
上海交通大学硕士学位论文答辩决议书 | 第107页 |