| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1. 引言 | 第11-22页 |
| 1.1 BVDV 生物学特征 | 第12页 |
| 1.1.1 BVDV 的形态特征 | 第12页 |
| 1.1.2 BVDV 的生物多样性 | 第12页 |
| 1.2 BVD/MD 的流行病学及危害 | 第12-14页 |
| 1.2.1 流行病学 | 第12-13页 |
| 1.2.2 BVDV 对生物制品的污染 | 第13页 |
| 1.2.3 BVDV 感染其它反刍动物 | 第13-14页 |
| 1.3 BVD/MD 在我国的防治状况 | 第14-15页 |
| 1.4 BVD/MD 的类型 | 第15-18页 |
| 1.4.1 急性感染 | 第15页 |
| 1.4.2 先天性感染 | 第15页 |
| 1.4.3 持续性感染 （PI） | 第15-17页 |
| 1.4.4 黏膜病 | 第17页 |
| 1.4.5 繁殖障碍 | 第17页 |
| 1.4.6 免疫抑制 | 第17-18页 |
| 1.4.7 血小板减少症 | 第18页 |
| 1.5 BVDV 诊断技术研究进展 | 第18-21页 |
| 1.5.1 BVDV 血清学检测方法进展 | 第18-19页 |
| 1.5.2 BVDV 病原学检测方法进展 | 第19-21页 |
| 1.6 研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 2. 材料与方法 | 第22-27页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 病毒与细胞 | 第22页 |
| 2.1.2 生物学试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 扩增引物 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第24页 |
| 2.2.2 BVDV 增殖和 TCID_(50)测定 | 第24页 |
| 2.2.3 样品处理和模板制备 | 第24页 |
| 2.2.4 PCR 引物的筛选 | 第24页 |
| 2.2.5 方法建立和反应条件优化 | 第24-25页 |
| 2.2.6 内参的选择和制备 | 第25页 |
| 2.2.7 敏感性试验 | 第25-26页 |
| 2.2.8 特异性试验 | 第26页 |
| 2.2.9 重复性试验 | 第26页 |
| 2.2.10 临床样品检测 | 第26页 |
| 2.2.11 接种 MDBK 细胞试验 | 第26-27页 |
| 3. 结果与分析 | 第27-37页 |
| 3.1 BVDV 目的基因 RT-PCR 扩增 | 第27-28页 |
| 3.2 BVDV 套式 RT-PCR 分型检测方法的建立和优化 | 第28-33页 |
| 3.2.1 退火温度优化 | 第28页 |
| 3.2.2 核酸最低检出量 | 第28-29页 |
| 3.2.3 引物浓度优化 | 第29页 |
| 3.2.4 rTaq 酶用量优化 | 第29-30页 |
| 3.2.5 Mg~(2+)用量优化 | 第30页 |
| 3.2.6 循环参数优化 | 第30-31页 |
| 3.2.7 内参的制备 | 第31页 |
| 3.2.8 方法完成检验 | 第31-32页 |
| 3.2.9 敏感性试验 | 第32-33页 |
| 3.2.10 特异性试验 | 第33页 |
| 3.3 东北不同地区奶牛厂临床采样检测 | 第33-36页 |
| 3.4 接种 MDBK 细胞试验 | 第36-37页 |
| 4. 讨论 | 第37-40页 |
| 4.1 引物的设计 | 第37页 |
| 4.2 RT-PCR 反应条件的优化 | 第37-38页 |
| 4.3 RT-PCR 反应的特异性及敏感性 | 第38页 |
| 4.4 RT-PCR 在病料的检测应用 | 第38页 |
| 4.5 内部参照的作用 | 第38-39页 |
| 4.6 BVDV 分型检测的意义 | 第39-40页 |
| 5. 结论 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-48页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第48页 |