| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第12-17页 |
| 1 引言 | 第17-34页 |
| 1.1 农药使用对人类生活的影响 | 第17-18页 |
| 1.2 蔬菜农药残留问题及解决现状 | 第18-19页 |
| 1.3 农药在植物体内的代谢 | 第19-20页 |
| 1.4 油菜素内酯在促进植物体内农药降解代谢中的作用 | 第20-25页 |
| 1.4.1 BRs的发现与存在 | 第20-21页 |
| 1.4.2 BR的生物合成及代谢 | 第21-22页 |
| 1.4.3 BR的信号转导机制 | 第22-24页 |
| 1.4.3.1 BR的受体 | 第22页 |
| 1.4.3.2 BR信号在细胞质和细胞核里的传递 | 第22-24页 |
| 1.4.4 BRs的生理功能 | 第24-25页 |
| 1.5 谷胱甘肽概述 | 第25-28页 |
| 1.5.1 谷胱甘肽的结构与性质 | 第25页 |
| 1.5.2 谷胱甘肽的生物合成及调控 | 第25-27页 |
| 1.5.3 GSH的分布、转移及降解代谢 | 第27页 |
| 1.5.4 GSH的生理功能 | 第27-28页 |
| 1.6 病毒诱导的基因沉默(VIGS) | 第28-31页 |
| 1.6.1 VIGS的作用机制 | 第29页 |
| 1.6.2 VIGS在植物基因功能研究中的应用 | 第29-30页 |
| 1.6.3 影响VIGS沉默效率的因素 | 第30-31页 |
| 1.6.4 VIGS技术的优缺点 | 第31页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第31-34页 |
| 2 番茄谷胱甘肽相关基因沉默植株的构建 | 第34-51页 |
| 摘要 | 第34-35页 |
| 2.1 材料与方法 | 第35-44页 |
| 2.1.1 实验材料与试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.2 番茄叶片总RNA提取、纯化和cDNA合成 | 第36-37页 |
| 2.1.3 番茄cDNA目的基因片段PCR扩增与回收纯化 | 第37-39页 |
| 2.1.4 质粒DNA提取 | 第39页 |
| 2.1.5 目标基因及TRV载体的酶切 | 第39-40页 |
| 2.1.6 目标基因片段与TRV载体的连接与转化 | 第40-41页 |
| 2.1.7 序列测定及分析 | 第41页 |
| 2.1.8 农杆菌GV3101电转化感受态细胞的制备及电转化 | 第41-42页 |
| 2.1.9 番茄幼苗VIGS侵染方法 | 第42-43页 |
| 2.1.10 荧光实时定量PCR(RT-PCR)分析 | 第43页 |
| 2.1.11 数据处理 | 第43-44页 |
| 2.2 结果与分析 | 第44-48页 |
| 2.2.1 番茄目的基因PCR扩增 | 第44-45页 |
| 2.2.2 目的基因TRV病毒载体的构建 | 第45-46页 |
| 2.2.3 农杆菌转化及侵染 | 第46-47页 |
| 2.2.4 目标基因沉默植株鉴定及沉默效率验证 | 第47-48页 |
| 2.3 讨论 | 第48-51页 |
| 3 谷胱甘肽参与番茄体内百菌清的降解代谢 | 第51-67页 |
| 摘要 | 第51-53页 |
| 3.1 材料与方法 | 第53-55页 |
| 3.1.1 基因沉默植物材料的获得 | 第53页 |
| 3.1.2 材料培养和试验设计 | 第53页 |
| 3.1.3 基因表达分析 | 第53-54页 |
| 3.1.4 谷胱甘肽、巯基、非蛋白结合态的巯基含量的测定 | 第54页 |
| 3.1.5 解毒相关酶GST,GR活力测定 | 第54-55页 |
| 3.1.6 可溶性蛋白的测定 | 第55页 |
| 3.1.7 百菌清残留量的测定 | 第55页 |
| 3.2 结果与分析 | 第55-63页 |
| 3.2.1 番茄目的基因沉默效率验证 | 第55-56页 |
| 3.2.2 基因沉默植株谷胱甘肽相关基因表达及GR酶活性对百菌清处理的响应 | 第56-58页 |
| 3.2.3 基因沉默植株谷胱甘肽含量及巯基含量对百菌清处理的响应 | 第58-59页 |
| 3.2.4 基因沉默对番茄体内农药解毒代谢基因表达的抑制 | 第59-61页 |
| 3.2.5 基因沉默植株GST酶活性对百菌清的响应 | 第61页 |
| 3.2.6 谷胱甘肽生物合成与再生相关基因沉默降低了番茄体内的百菌清代谢 | 第61-63页 |
| 3.3 讨论 | 第63-67页 |
| 4 谷胱甘肽参与BR促进植物体内百菌清的降解代谢 | 第67-81页 |
| 摘要 | 第67-68页 |
| 4.1 材料与方法 | 第68-69页 |
| 4.1.1 基因沉默植物材料的获得 | 第68页 |
| 4.1.2 材料培养和试验设计 | 第68-69页 |
| 4.1.3 基因表达分析 | 第69页 |
| 4.1.4 谷胱甘肽、巯基、非蛋白结合态巯基含量的测定 | 第69页 |
| 4.1.5 解毒相关酶GST,GR活力测定 | 第69页 |
| 4.1.6 可溶性蛋白的测定 | 第69页 |
| 4.1.7 百菌清残留量的测定 | 第69页 |
| 4.2 结果与分析 | 第69-78页 |
| 4.2.1 番茄目标基因沉默效率的验证 | 第69-70页 |
| 4.2.2 EBR及百菌清对基因沉默植株谷胱甘肽相关物质含量的影响 | 第70-72页 |
| 4.2.3 EBR及杀菌剂对基因沉默植株GST、GR酶活力的影响 | 第72-73页 |
| 4.2.4 EBR及杀菌剂对基因沉默植株谷胱甘肽相关基因表达的影响 | 第73-75页 |
| 4.2.5 EBR及杀菌剂对基因沉默植株体内农药三相解毒代谢的影响 | 第75-76页 |
| 4.2.6 谷胱甘肽在EBR促进农药降解代谢中的作用 | 第76-78页 |
| 4.3 讨论 | 第78-81页 |
| 5 BR诱导H_2O_2信号介导植物体内百菌清的谷胱甘肽解毒途径 | 第81-93页 |
| 摘要 | 第81-83页 |
| 5.1 材料与方法 | 第83-85页 |
| 5.1.1 番茄RBOH、BRI1基因沉默植物材料的获得 | 第83页 |
| 5.1.2 材料培养和试验设计 | 第83-84页 |
| 5.1.3 基因表达分析 | 第84页 |
| 5.1.4 谷胱甘肽、巯基、非蛋白结合态的巯基含量的测定 | 第84页 |
| 5.1.5 解毒相关酶GST,GR活力测定 | 第84页 |
| 5.1.6 百菌清残留量的测定 | 第84页 |
| 5.1.7 H_2O_2含量测定 | 第84-85页 |
| 5.1.8 H_2O_2组织化学染色 | 第85页 |
| 5.2 结果与分析 | 第85-91页 |
| 5.2.1 番茄BRI1和RBOH基因沉默对H_2O_2含量及CHT残留量的影响 | 第85-87页 |
| 5.2.2 EBR及CHT处理对BRI1和RBOH基因沉默植株谷胱甘肽相关物质的影响 | 第87-89页 |
| 5.2.3 EBR诱导H_2O_2信号介导植物谷胱甘肽的响应 | 第89-90页 |
| 5.2.4 EBR及CHT处理对BRI1和RBOH基因沉默植株GST、GR酶活力的影响 | 第90-91页 |
| 5.3 讨论 | 第91-93页 |
| 6 谷胱甘肽S-转移酶参与BR促进番茄体内百菌清的降解代谢 | 第93-104页 |
| 摘要 | 第93-95页 |
| 6.1 材料与方法 | 第95-96页 |
| 6.1.1 基因沉默植物材料的获得 | 第95页 |
| 6.1.2 材料培养和试验设计 | 第95页 |
| 6.1.3 基因表达分析 | 第95页 |
| 6.1.4 谷胱甘肽、非蛋白结合态的巯基含量的测定 | 第95页 |
| 6.1.5 解毒相关酶GST酶活力及可溶性蛋白的测定测定 | 第95-96页 |
| 6.1.6 百菌清残留量的测定 | 第96页 |
| 6.2 结果与分析 | 第96-102页 |
| 6.2.1 EBR诱导H_2O_2信号介导植物谷胱甘肽S-转移酶活力的响应 | 第96-98页 |
| 6.2.2 番茄目标基因沉默植株基因表达及GST酶活性 | 第98页 |
| 6.2.3 BR对GST基因沉默植株农药降解代谢的影响 | 第98-99页 |
| 6.2.4 EBR及百菌清对基因沉默植株谷胱甘肽相关物质代谢的影响 | 第99-101页 |
| 6.2.5 EBR及CHT处理对基因沉默植株GST酶活力的影响 | 第101-102页 |
| 6.3 讨论 | 第102-104页 |
| 7 总结与展望 | 第104-108页 |
| 7.1 结论 | 第104-106页 |
| 7.2 展望 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-124页 |
