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ZFNs介导肝脏特异性表达外源基因hsfat-1在猪ROSA26位点整合与重构胚的制备

摘要第8-10页
ABSTRACT第10-11页
缩略词表第12-13页
1 前言第13-25页
    1.1 研究问题的由来第13页
    1.2 fat-1基因研究进展第13-15页
    1.3 基因的定点整合研究进展第15-17页
        1.3.1 整合位点选择第15-16页
        1.3.2 目的基因座的定点切割第16-17页
    1.4 目的基因的表达调控策略第17-19页
    1.5 转基因动物制备方法第19-21页
        1.5.1 DNA显微注射法第19页
        1.5.2 慢转录病毒感染法第19页
        1.5.3 精子载体法第19-20页
        1.5.4 体细胞核移植第20页
        1.5.5 转座子介导的基因转移第20-21页
        1.5.6 诱导性多能干细胞第21页
    1.6 转基因动物应用第21-24页
        1.6.1 转基因动物生物反应器第21-22页
        1.6.2 实验动物模型第22页
        1.6.3 基因治疗第22-23页
        1.6.4 改造生物、培育新的生物品种第23页
        1.6.5 器官移植第23-24页
    1.7 本研究的目的意义第24-25页
2 材料与方法第25-42页
    2.1 材料第25-27页
        2.1.1 主要组织样品第25页
        2.1.2 主要试剂第25-26页
        2.1.3 主要仪器及耗材第26-27页
        2.1.4 主要分析软件及数据库第27页
    2.2 方法第27-42页
        2.2.1 本研究的技术路线第27页
        2.2.2 hsfat-1基因优化合成第27-28页
        2.2.3 hsfat-1基因功能验证第28-34页
        2.2.4 猪ROSA26定点切割锌指核酸酶(ZFNs)设计第34-35页
        2.2.5 定点整合载体ROSA26-hsfat-1构建及验证第35-38页
        2.2.6 细胞筛选及鉴定第38-40页
        2.2.7 重构胚的制备与移植第40-42页
3 结果第42-58页
    3.1 hsfat-1基因优化合成第42-43页
    3.2 hsfat-1基因功能验证第43-50页
        3.2.1 pcDNA3.1(+)hsfat-1质粒提取及酶切鉴定第43页
        3.2.2 pcDNA3.1(+)hsfat-1、pcDNA3.1(+)载体转染猪胎儿成纤维细胞第43-48页
        3.2.3 hsfat-1阳性克隆去饱和酶功能验证第48-50页
    3.3 猪ROSA26定点切割ZFNs预测结果第50-51页
    3.4 定点整合载体ROSA26-hsfat-1构建及细胞筛选第51-56页
        3.4.1 定点整合载体ROSA26-hsfat-1构建第51-53页
        3.4.2 ROSA26-hsfat-1转基因细胞筛选第53-56页
    3.5 重构胚的制备与移植第56-58页
        3.5.1 重构胚的制备第56-57页
        3.5.2 重构胚的移植第57-58页
4 讨论第58-61页
    4.1 关于hsfat-1基因编码的脂肪酸去饱和酶的活性第58页
    4.2 关于本研究基因打靶效率的讨论第58-59页
    4.3 单克隆细胞筛选的效率效率的问题第59-60页
    4.4 关于筛选标记基因的去除第60-61页
5 小结第61-62页
    5.1 本研究结论第61页
    5.2 本研究创新点与特色第61页
    5.3 本研究不足点与下一步工作建议第61-62页
参考文献第62-66页
附录第66-67页
致谢第67页

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