| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第13页 |
| 1.2 fat-1基因研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3 基因的定点整合研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.1 整合位点选择 | 第15-16页 |
| 1.3.2 目的基因座的定点切割 | 第16-17页 |
| 1.4 目的基因的表达调控策略 | 第17-19页 |
| 1.5 转基因动物制备方法 | 第19-21页 |
| 1.5.1 DNA显微注射法 | 第19页 |
| 1.5.2 慢转录病毒感染法 | 第19页 |
| 1.5.3 精子载体法 | 第19-20页 |
| 1.5.4 体细胞核移植 | 第20页 |
| 1.5.5 转座子介导的基因转移 | 第20-21页 |
| 1.5.6 诱导性多能干细胞 | 第21页 |
| 1.6 转基因动物应用 | 第21-24页 |
| 1.6.1 转基因动物生物反应器 | 第21-22页 |
| 1.6.2 实验动物模型 | 第22页 |
| 1.6.3 基因治疗 | 第22-23页 |
| 1.6.4 改造生物、培育新的生物品种 | 第23页 |
| 1.6.5 器官移植 | 第23-24页 |
| 1.7 本研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-42页 |
| 2.1 材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 主要组织样品 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要仪器及耗材 | 第26-27页 |
| 2.1.4 主要分析软件及数据库 | 第27页 |
| 2.2 方法 | 第27-42页 |
| 2.2.1 本研究的技术路线 | 第27页 |
| 2.2.2 hsfat-1基因优化合成 | 第27-28页 |
| 2.2.3 hsfat-1基因功能验证 | 第28-34页 |
| 2.2.4 猪ROSA26定点切割锌指核酸酶(ZFNs)设计 | 第34-35页 |
| 2.2.5 定点整合载体ROSA26-hsfat-1构建及验证 | 第35-38页 |
| 2.2.6 细胞筛选及鉴定 | 第38-40页 |
| 2.2.7 重构胚的制备与移植 | 第40-42页 |
| 3 结果 | 第42-58页 |
| 3.1 hsfat-1基因优化合成 | 第42-43页 |
| 3.2 hsfat-1基因功能验证 | 第43-50页 |
| 3.2.1 pcDNA3.1(+)hsfat-1质粒提取及酶切鉴定 | 第43页 |
| 3.2.2 pcDNA3.1(+)hsfat-1、pcDNA3.1(+)载体转染猪胎儿成纤维细胞 | 第43-48页 |
| 3.2.3 hsfat-1阳性克隆去饱和酶功能验证 | 第48-50页 |
| 3.3 猪ROSA26定点切割ZFNs预测结果 | 第50-51页 |
| 3.4 定点整合载体ROSA26-hsfat-1构建及细胞筛选 | 第51-56页 |
| 3.4.1 定点整合载体ROSA26-hsfat-1构建 | 第51-53页 |
| 3.4.2 ROSA26-hsfat-1转基因细胞筛选 | 第53-56页 |
| 3.5 重构胚的制备与移植 | 第56-58页 |
| 3.5.1 重构胚的制备 | 第56-57页 |
| 3.5.2 重构胚的移植 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 4.1 关于hsfat-1基因编码的脂肪酸去饱和酶的活性 | 第58页 |
| 4.2 关于本研究基因打靶效率的讨论 | 第58-59页 |
| 4.3 单克隆细胞筛选的效率效率的问题 | 第59-60页 |
| 4.4 关于筛选标记基因的去除 | 第60-61页 |
| 5 小结 | 第61-62页 |
| 5.1 本研究结论 | 第61页 |
| 5.2 本研究创新点与特色 | 第61页 |
| 5.3 本研究不足点与下一步工作建议 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
