| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-24页 |
| 1.1 病原学特性 | 第13-14页 |
| 1.1.1 病原的分类 | 第13页 |
| 1.1.2 病原的形态 | 第13-14页 |
| 1.2 生活史 | 第14-15页 |
| 1.3 流行病学 | 第15页 |
| 1.4 环形泰勒虫病诊断方法的研究 | 第15-16页 |
| 1.5 裂殖体感染细胞的体外培养及生物学特性 | 第16-18页 |
| 1.6 宿主抗环形泰勒虫感染的免疫 | 第18页 |
| 1.7 环形泰勒虫疫苗的研究 | 第18-19页 |
| 1.8 环形泰勒虫基因组研究 | 第19-20页 |
| 1.9 泰勒虫转化宿主细胞相关的信号通路及细胞因子 | 第20-22页 |
| 1.9.1 NF-kB信号通路 | 第20页 |
| 1.9.2 MAPKs信号通路 | 第20页 |
| 1.9.3 JNK信号通路 | 第20-21页 |
| 1.9.4 PI3-K-Akt/PKB信号通路 | 第21页 |
| 1.9.5 p53信号通路 | 第21页 |
| 1.9.6 c-myc转录因子 | 第21-22页 |
| 1.9.7 胞质赖氨酸甲基转移酶SMYD3 | 第22页 |
| 1.10 抑制性消减杂交（SSH）技术 | 第22-23页 |
| 1.10.1 SSH的原理 | 第22-23页 |
| 1.10.2 SSH的应用 | 第23页 |
| 1.11 研究意义 | 第23-24页 |
| 第二章 环形泰勒虫转化细胞抑制性消减文库的构建 | 第24-39页 |
| 2.1 材料 | 第24-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 环形泰勒虫裂殖体转化细胞株的复苏和培养 | 第25页 |
| 2.2.2 非感染牛外周血单个核细胞（PBMCs）的分离和培养 | 第25页 |
| 2.2.3 总RNA的提取及mRNA纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.4 抑制性消减文库的构建 | 第26-28页 |
| 2.2.5 消减文库生成 | 第28页 |
| 2.2.6 阳性克隆PCR扩增与测序 | 第28-29页 |
| 2.2.7 生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-37页 |
| 2.3.1 总RNA的提取及mRNA纯化 | 第29页 |
| 2.3.2 双链cDNA（dscDNA）合成与Rsa I酶切 | 第29-30页 |
| 2.3.3 接头连接效率检测 | 第30-31页 |
| 2.3.4 消减杂交后PCR产物扩增 | 第31页 |
| 2.3.5 消减文库鉴定 | 第31页 |
| 2.3.6 生物信息学分析 | 第31-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 环形泰勒虫裂殖体蛋白基因CDS克隆及信息学分析 | 第39-48页 |
| 3.1 材料 | 第39页 |
| 3.2 方法 | 第39-42页 |
| 3.2.1 裂殖体感染细胞总RNA提取及cDNA第一链合成 | 第39-40页 |
| 3.2.2 引物设计与合成 | 第40-41页 |
| 3.2.3 PCR扩增及测序 | 第41页 |
| 3.2.4 序列比对 | 第41-42页 |
| 3.2.5 部分裂殖体蛋白基因CDS的生物信息学分析 | 第42页 |
| 3.3 结果 | 第42-46页 |
| 3.3.1 裂殖体蛋白基因的扩增、克隆及测序 | 第42页 |
| 3.3.2 序列比对 | 第42-43页 |
| 3.3.3 部分基因的生物信息学分析 | 第43-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 环形泰勒虫转化细胞Real-time PCR内参基因的筛选 | 第48-57页 |
| 4.1 材料 | 第48-49页 |
| 4.2 方法 | 第49-51页 |
| 4.2.1 环形泰勒虫裂殖体转化细胞株的复苏和培养 | 第49页 |
| 4.2.2 非感染牛外周血单个核细胞（PBMCs）的分离和培养 | 第49页 |
| 4.2.3 内参基因选择及引物合成 | 第49-51页 |
| 4.2.4 总RNA的提取及cDNA第一链合成 | 第51页 |
| 4.2.5 SYBR Green实时荧光定量PCR | 第51页 |
| 4.2.6 数据分析 | 第51页 |
| 4.3 结果 | 第51-55页 |
| 4.3.1 总RNA提取 | 第51-52页 |
| 4.3.2 Real-time PCR的融解曲线及标准曲线分析 | 第52-54页 |
| 4.3.3 geNorm软件分析 | 第54-55页 |
| 4.3.4 NormFinder软件分析 | 第55页 |
| 4.3.5 最优内参基因的综合评价 | 第55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 环形泰勒虫转化细胞抑制性消减文库差异基因的Real-time PCR分析 | 第57-68页 |
| 5.1 材料 | 第57-58页 |
| 5.2 方法 | 第58-61页 |
| 5.2.1 环形泰勒虫裂殖体转化细胞株的复苏和培养 | 第58页 |
| 5.2.2 非感染牛外周血单个核细胞（PBMCs）的分离和培养 | 第58页 |
| 5.2.3 环形泰勒虫裂殖子繁殖与纯化 | 第58页 |
| 5.2.4 引物合成 | 第58-60页 |
| 5.2.5 总RNA的提取及cDNA第一链合成 | 第60页 |
| 5.2.6 989/990和PIRO-A/B验证cDNA质量 | 第60页 |
| 5.2.7 实时荧光定量PCR引物的普通PCR扩增验证 | 第60-61页 |
| 5.2.8 SYBR Green实时荧光定量PCR | 第61页 |
| 5.3 试验结果 | 第61-66页 |
| 5.3.1 总RNA的提取及cDNA第一链合成 | 第61-62页 |
| 5.3.2 989/990和PIRO-A/B验证cDNA质量 | 第62页 |
| 5.3.3 实时荧光定量引物的普通PCR扩增验证 | 第62-64页 |
| 5.3.4 SYBR Green实时荧光定量PCR | 第64-66页 |
| 5.4 讨论 | 第66-68页 |
| 第六章 布帕伐醌（BW720c）作用环形泰勒虫转化细胞前后肿瘤相关基因的变化 | 第68-77页 |
| 6.1 材料 | 第68-69页 |
| 6.2 方法 | 第69-70页 |
| 6.2.1 环形泰勒虫裂殖体转化细胞株的复苏与培养 | 第69页 |
| 6.2.2 引物设计与合成 | 第69页 |
| 6.2.3 牛肿瘤相关基因TFG（194）的原核表达及抗体制备 | 第69-70页 |
| 6.2.4 BW720c对环形泰勒虫裂殖体转化细胞的影响 | 第70页 |
| 6.3 试验结果 | 第70-75页 |
| 6.3.1 TFG(194)基因扩增及原核表达载体构建 | 第70-71页 |
| 6.3.2 pGEX-4T-1/TFG(194)蛋白的表达与多克隆抗体制备 | 第71-73页 |
| 6.3.3 BW720c对环形泰勒虫裂殖体转化细胞的影响 | 第73-75页 |
| 6.4 讨论 | 第75-77页 |
| 第七章 全文结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-89页 |
| 附录 | 第89-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 作者简历 | 第94页 |
