| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 鸡球虫概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 鸡球虫及其发育史 | 第11-12页 |
| 1.1.2 鸡球虫入侵机制研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.3 Rhomboid研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2 鸡抗球虫免疫反应 | 第14-16页 |
| 1.2.1 体液免疫 | 第14-15页 |
| 1.2.2 细胞免疫 | 第15-16页 |
| 1.3 IFN-γ研究进展 | 第16页 |
| 1.3.1 IFN-γ概述 | 第16页 |
| 1.3.2 鸡IFN-γ在抗球虫病中的作用 | 第16页 |
| 1.4 抗球虫病DNA疫苗的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.5 研究的目的与意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 实验动物及虫种 | 第19页 |
| 2.1.2 菌株、载体及细胞 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.4 主要仪器与设备 | 第19-20页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第20-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-38页 |
| 2.2.1 堆型艾美耳球虫Rhomboid基因的克隆与鉴定 | 第22-27页 |
| 2.2.2 Rhomboid蛋白的原核表达及鉴定 | 第27-29页 |
| 2.2.3 Rhomboid蛋白多克隆抗体的制备及生物学活性检测 | 第29-31页 |
| 2.2.4 重组真核表达质粒的构建及体外瞬时转染 | 第31页 |
| 2.2.5 重组真核表达质粒的大量提取及纯化 | 第31-33页 |
| 2.2.6 试验动物的分组和处理 | 第33-34页 |
| 2.2.7 体外淋巴细胞增殖试验 | 第34-35页 |
| 2.2.8 ELISA检测外周血中抗Rhomboid蛋白的IgG抗体水平 | 第35页 |
| 2.2.9 免疫重组真核表达质粒对球虫感染的保护效果 | 第35-37页 |
| 2.2.10 数据处理 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-55页 |
| 3.1 堆型艾美耳球虫Rhomboid基因的克隆与鉴定 | 第38-39页 |
| 3.1.1 Rhomboid基因的克隆 | 第38页 |
| 3.1.2 重组克隆质粒pMD18-T-Rhomboid构建与鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2 Rhomboid蛋白的原核表达及鉴定 | 第39-45页 |
| 3.2.1 原核表达质粒pGEX-Rhomboid的构建及鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.2 Rhomboid蛋白的原核表达及纯化 | 第40-41页 |
| 3.2.3 Rhomboid蛋白多克隆抗体的制备及生物学活性检测 | 第41-42页 |
| 3.2.4 重组真核表达质粒的构建及鉴定 | 第42-44页 |
| 3.2.5 重组真核表达质粒的体外瞬时表达 | 第44-45页 |
| 3.3 雏鸡脾脏及外周血T淋巴细胞增殖功能变化 | 第45-48页 |
| 3.3.1 脾脏T淋巴细胞增殖功能变化 | 第45-47页 |
| 3.3.2 外周血T淋巴细胞增殖功能变化 | 第47-48页 |
| 3.4 雏鸡脾脏及外周血B淋巴细胞增殖功能变化 | 第48-50页 |
| 3.4.1 脾脏B淋巴细胞增殖功能变化 | 第48-49页 |
| 3.4.2 外周血B淋巴细胞增殖功能变化 | 第49-50页 |
| 3.5 Rhomboid蛋白刺激雏鸡脾脏和外周血淋巴细胞增殖功能变化 | 第50-52页 |
| 3.5.1 Rhomboid蛋白刺激脾脏淋巴细胞增殖功能变化 | 第50-51页 |
| 3.5.2 Rhomboid蛋白刺激外周血淋巴细胞增殖功能变化 | 第51-52页 |
| 3.6 外周血中抗Rhomboid蛋白IgG抗体含量动态变化 | 第52-53页 |
| 3.7 重组真核表达质粒抗球虫保护效果 | 第53-55页 |
| 3.7.1 雏鸡体增重情况 | 第53-54页 |
| 3.7.2 克粪便卵囊排出数与十二指肠病变计分 | 第54页 |
| 3.7.3 抗球虫指数 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 4.1 堆型艾美耳球虫Rhomboid抗原的选择 | 第55-56页 |
| 4.2 重组Rhomboid蛋白的表达 | 第56页 |
| 4.3 重组DNA疫苗诱导的免疫反应与保护作用 | 第56-59页 |
| 4.3.1 雏鸡免疫后T、B淋巴细胞增殖功能变化 | 第57页 |
| 4.3.2 Rhomboid蛋白刺激后淋巴细胞增殖功能变化 | 第57页 |
| 4.3.3 外周血中抗Rhomboid蛋白IgG抗体动态变化 | 第57-58页 |
| 4.3.4 重组DNA疫苗的抗球虫免疫保护效果 | 第58-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
