| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第13-24页 |
| 1.1 芽胞杆菌简介 | 第13-14页 |
| 1.2 球形芽胞杆菌的研究 | 第14-16页 |
| 1.2.1 球形芽胞杆菌的基本特征 | 第14-15页 |
| 1.2.2 球形芽胞杆菌的应用 | 第15-16页 |
| 1.2.2.1 球形芽胞杆菌在蚊虫防治中的作用 | 第15-16页 |
| 1.2.2.2 球形芽胞杆菌在环境中的作用 | 第16页 |
| 1.2.2.3 球形芽胞杆菌在抗肿瘤中的作用 | 第16页 |
| 1.3 抗肿瘤药物的研究进展 | 第16-23页 |
| 1.3.1 恶性肿瘤概述 | 第16-17页 |
| 1.3.2 抗肿瘤药物研究现状 | 第17-18页 |
| 1.3.3 抗肿瘤药物获取途径 | 第18-20页 |
| 1.3.4 芽胞杆菌抗肿瘤研究 | 第20-23页 |
| 1.3.4.1 芽胞杆菌代谢产物抗肿瘤研究 | 第20-21页 |
| 1.3.4.2 芽胞杆菌parasporins抗肿瘤研究 | 第21-23页 |
| 1.4 立题依据和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-41页 |
| 2.1 材料 | 第24-31页 |
| 2.1.1 质粒、菌株和细胞 | 第24页 |
| 2.1.2 引物 | 第24-25页 |
| 2.1.3 培养基和抗生素 | 第25页 |
| 2.1.3.1 细菌培养基和抗生素 | 第25页 |
| 2.1.3.2 细胞培养基和抗生素 | 第25页 |
| 2.1.4 试剂 | 第25-29页 |
| 2.1.4.1 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.4.2 试剂盒 | 第26页 |
| 2.1.4.3 酶和Marker | 第26页 |
| 2.1.4.4 琼脂糖凝胶电泳缓冲液试剂 | 第26页 |
| 2.1.4.5 SDS-PAGE电泳试剂 | 第26-28页 |
| 2.1.4.6 胶内酶解试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.5 反应体系 | 第29-30页 |
| 2.1.5.1 PCR体系 | 第29页 |
| 2.1.5.2 酶切体系 | 第29页 |
| 2.1.5.3 连接体系 | 第29-30页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 2.2 方法 | 第31-41页 |
| 2.2.1 BsX050的分离纯化与鉴定 | 第31-33页 |
| 2.2.1.1 BsX050分离纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.1.2 BsX050形态观察 | 第32页 |
| 2.2.1.3 BsX05016S rRNA基因同源序列分析 | 第32-33页 |
| 2.2.2 BsX050生长曲线测定 | 第33页 |
| 2.2.3 BsX050生理生化实验 | 第33页 |
| 2.2.4 BsX050发酵液抗肿瘤活性测定 | 第33-35页 |
| 2.2.4.1 细胞培养 | 第33-34页 |
| 2.2.4.2 BsX050不同生长阶段发酵上清液细胞毒性检测 | 第34页 |
| 2.2.4.3 BsX050的代谢产物粗提物的抗肿瘤谱测定 | 第34-35页 |
| 2.2.4.4 BsX050发酵上清中抗肿瘤活性物的分离 | 第35页 |
| 2.2.5 BsX050伴胞晶体的特性 | 第35-37页 |
| 2.2.5.1 BsX050伴胞晶体的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.5.2 电镜观察BsX050伴胞晶体 | 第36页 |
| 2.2.5.3 SDS-PAGE分析BsX050晶体蛋白 | 第36页 |
| 2.2.5.4 BsX050晶体蛋白的胶内酶解质谱鉴定 | 第36页 |
| 2.2.5.5 BsX050晶体蛋白的溶解性和稳定性分析 | 第36-37页 |
| 2.2.5.6 Zn~(2+)对晶体蛋白相对含量的影响 | 第37页 |
| 2.2.5.7 测定BsX050菌株在含Zn~(2+)培养基中的生长曲线 | 第37页 |
| 2.2.8 BsX050晶体毒素蛋白的抗肿瘤活性检测 | 第37-41页 |
| 2.2.8.1 MTT实验测定细胞存活率 | 第38页 |
| 2.2.8.2 扫描电镜观察细胞形态变化 | 第38页 |
| 2.2.8.3 免疫荧光观察细胞亚显微结构的变化 | 第38-39页 |
| 2.2.8.4 DNA Ladder检测细胞凋亡 | 第39页 |
| 2.2.8.5 流式细胞术检测细胞的凋亡与坏死 | 第39页 |
| 2.2.8.6 流式细胞术检测细胞周期阻滞 | 第39-40页 |
| 2.2.8.7 Western blotting检测凋亡蛋白 | 第40-41页 |
| 第三章 结果和分析 | 第41-63页 |
| 3.1 BSX050鉴定 | 第41-45页 |
| 3.1.1.形态特征 | 第41页 |
| 3.1.2.系统发育树构建 | 第41-43页 |
| 3.1.3.生理生化特征 | 第43-44页 |
| 3.1.4 BsX050生长曲线 | 第44-45页 |
| 3.2 BSX050发酵液抗肿瘤活性 | 第45-46页 |
| 3.2.1 不同时期抗肿瘤活性 | 第45页 |
| 3.2.2 BsX050代谢产物粗提物的抗肿瘤谱测定 | 第45-46页 |
| 3.3.代谢活性物的初步分离纯化 | 第46-49页 |
| 3.4.BSX050伴胞晶体特性研究 | 第49-54页 |
| 3.4.1 BsX050伴胞晶体形态特性 | 第49页 |
| 3.4.2 BsX050晶体蛋白SDS-PAGE检测及胶内酶解质谱鉴定 | 第49-50页 |
| 3.4.3 BsX050晶体蛋白的溶解性和稳定性分析 | 第50-53页 |
| 3.4.4 Zn~(2+)对BsX050菌株晶体蛋白产量的影响 | 第53页 |
| 3.4.5 Zn~(2+)对BsX050菌株生长的影响 | 第53-54页 |
| 3.5.BSX050晶体毒素蛋白抗肿瘤活性研究 | 第54-63页 |
| 3.5.1 BsX050晶体毒素蛋白对细胞形态的影响 | 第54-56页 |
| 3.5.2 BsX050晶体毒素蛋白对细胞活性和细胞增殖的影响 | 第56-57页 |
| 3.5.3 BsX050晶体毒素蛋白对细胞亚显微结构的影响 | 第57-59页 |
| 3.5.4 DNA Ladder | 第59页 |
| 3.5.5 BsX050晶体毒素蛋白诱导 4T1细胞发生凋亡 | 第59-60页 |
| 3.5.6 western blotting检测细胞凋亡相关蛋白 | 第60-61页 |
| 3.5.7 BsX050晶体毒素蛋白使 4T1细胞阻滞在G0/G1期 | 第61-63页 |
| 第四章 讨论 | 第63-69页 |
| 4.1 BSX050发酵液抗肿瘤活性 | 第63-64页 |
| 4.2 芽胞杆菌代谢物分离及鉴定 | 第64-65页 |
| 4.3 BSX050晶体蛋白 | 第65页 |
| 4.4 BSX050晶体毒素蛋白抗肿瘤活性 | 第65-66页 |
| 4.5 BSX050晶体蛋白诱导细胞凋亡 | 第66-67页 |
| 4.6 BSX050晶体蛋白对细胞周期的影响 | 第67-69页 |
| 第五章 小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 缩略词表 | 第78-79页 |
| 论文发表情况 | 第79-80页 |
| 本论文感谢以下项目的资助 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
