| 致谢 | 第4-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 缩略语表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-27页 |
| 1 羽毛粉概述 | 第17-18页 |
| 1.1 羽毛粉资源现状 | 第17页 |
| 1.2 羽毛粉的理化特性及营养价值 | 第17-18页 |
| 1.3 羽毛粉的加工处理方法 | 第18页 |
| 2 角蛋白酶研究进展 | 第18-23页 |
| 2.1角蛋白酶的微生物来源 | 第18-19页 |
| 2.2 角蛋白酶的理化性质 | 第19-20页 |
| 2.3 角蛋白酶作用机理 | 第20页 |
| 2.4 角蛋白酶基因的克隆及异源表达 | 第20-23页 |
| 3 DNA改组研究进展 | 第23-25页 |
| 3.1 DNA改组的基本原理 | 第23-24页 |
| 3.2 DNA改组技术的发展 | 第24-25页 |
| 3.3 DNA改组基因文库筛选 | 第25页 |
| 4 毕赤酵母表达系统 | 第25-26页 |
| 5 目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 羽毛粉降解菌的筛选及降解效果研究 | 第27-37页 |
| 1 试验材料 | 第27-28页 |
| 1.1 仪器设备 | 第27页 |
| 1.2 菌种 | 第27页 |
| 1.3 试剂 | 第27页 |
| 1.4 培养基 | 第27页 |
| 1.5 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第27-28页 |
| 2 试验方法 | 第28-30页 |
| 2.1 菌种初筛 | 第28-29页 |
| 2.2 米曲霉和枯草芽孢杆菌在羽毛粉培养基中产蛋白酶活力测定 | 第29页 |
| 2.3 米曲霉对羽毛粉的降解效果 | 第29-30页 |
| 2.4 枯草芽孢杆菌对羽毛粉的降解效果 | 第30页 |
| 2.5 蛋白酶活力测定 | 第30页 |
| 2.6 可溶性蛋白含量测定 | 第30页 |
| 2.7 数据处理 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-34页 |
| 3.1 菌种初筛 | 第30-31页 |
| 3.2 米曲霉和枯草芽孢杆菌在羽毛粉培养基中产蛋白酶活力 | 第31-32页 |
| 3.3 米曲霉对羽毛粉降解效果的研究 | 第32-33页 |
| 3.4 枯草芽孢杆菌对羽毛粉降解效果的研究 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 4.1 羽毛粉降解菌的初步筛选和产蛋白酶种类 | 第34-35页 |
| 4.2 米曲霉和枯草芽孢杆菌对羽毛粉的降解效果 | 第35-36页 |
| 5 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 米曲霉和枯草芽孢杆菌蛋白酶基因的克隆与鉴定 | 第37-51页 |
| 1 试验材料 | 第37-38页 |
| 1.1 试验仪器 | 第37页 |
| 1.2 试验菌种与质粒 | 第37页 |
| 1.3 主要试剂 | 第37页 |
| 1.4 培养基和溶液 | 第37-38页 |
| 2 试验方法 | 第38-44页 |
| 2.1 引物设计 | 第38-39页 |
| 2.2 米曲霉和枯草芽孢杆菌总RNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.3 四种蛋白酶基因的RT-PCR | 第40页 |
| 2.4 RT-PCR产物的纯化与回收 | 第40-41页 |
| 2.5 四种蛋白酶基因与pMD19-T载体的连接 | 第41页 |
| 2.6 连接产物的转化 | 第41-42页 |
| 2.7 阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第42-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-49页 |
| 3.1 米曲霉和枯草芽孢杆菌总RNA的提取 | 第44页 |
| 3.2 四种蛋白酶基因RT-PCR的扩增结果 | 第44-45页 |
| 3.3 四种蛋白酶基因重组质粒的蓝白斑筛选 | 第45-46页 |
| 3.4 蛋白酶基因重组克隆的鉴定 | 第46-48页 |
| 3.5 四种蛋白酶基因序列分析 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 5 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 米曲霉和枯草芽孢杆菌蛋白酶基因的DNA改组 | 第51-62页 |
| 1 试验材料 | 第51页 |
| 1.1 试验仪器 | 第51页 |
| 1.2 试验菌种与质粒 | 第51页 |
| 1.3 主要试剂 | 第51页 |
| 1.4 培养基和溶液 | 第51页 |
| 2 试验方法 | 第51-56页 |
| 2.1 基因准备 | 第51页 |
| 2.2 蛋白酶基因的片段化 | 第51-52页 |
| 2.3 无引物PCR | 第52-53页 |
| 2.4 有引物PCR | 第53-55页 |
| 2.5 改组蛋白酶基因与pMD19-T载体的连接 | 第55页 |
| 2.6 连接产物的转化 | 第55页 |
| 2.7 蛋白酶基因DNA改组结果筛选 | 第55页 |
| 2.8 重组质粒提取和序列测定 | 第55页 |
| 2.9 改组蛋白酶基因序列比对和分析 | 第55-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-60页 |
| 3.1 米曲霉和枯草芽孢杆菌蛋白酶基因准备 | 第56页 |
| 3.2 蛋白酶基因片段化 | 第56-57页 |
| 3.3 蛋白酶基因片段的无引物PCR | 第57页 |
| 3.4 蛋白酶基因片段的有引物PCR | 第57-59页 |
| 3.5 改组蛋白酶基因筛选 | 第59-60页 |
| 3.6 改组蛋白酶基因序列分析 | 第60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 5 小结 | 第61-62页 |
| 第五章 蛋白酶基因真核表达载体构建和毕赤酵母转化 | 第62-76页 |
| 1 试验材料 | 第62-63页 |
| 1.1 试验仪器 | 第62页 |
| 1.2 试验菌种与质粒 | 第62页 |
| 1.3 主要试剂 | 第62页 |
| 1.4 表达质粒pGAPZαA的图谱 | 第62-63页 |
| 1.5 培养基和溶液 | 第63页 |
| 2 试验方法 | 第63-67页 |
| 2.1 蛋白酶基因真核表达载体的构建 | 第63-65页 |
| 2.2 六种重组pGAPZαA-蛋白酶基因载体的电击转化及在酵母中的高效表达 | 第65-66页 |
| 2.3 蛋白酶重组酵母菌的鉴定及酶活测定 | 第66-67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-74页 |
| 3.1 蛋白酶基因重组质粒载体的构建 | 第67-71页 |
| 3.2 蛋白酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第71-74页 |
| 4 讨论 | 第74-75页 |
| 5 小结 | 第75-76页 |
| 第六章 米曲霉中性蛋白酶基因的二次DNA改组 | 第76-84页 |
| 1 试验材料 | 第76页 |
| 2 试验方法 | 第76-78页 |
| 2.1 六种蛋白酶基因的准备 | 第76页 |
| 2.2 米曲霉中性蛋白酶基因的二次改组 | 第76-77页 |
| 2.3 二次改组蛋白酶基因的转化和筛选 | 第77页 |
| 2.4 二次DNA改组蛋白酶基因转化毕赤酵母及酶活测定 | 第77-78页 |
| 2.5 重组毕赤酵母产蛋白酶酶学性质分析 | 第78页 |
| 3 结果与分析 | 第78-82页 |
| 3.1 米曲霉中性蛋白酶基因的二次DNA改组 | 第78-79页 |
| 3.2 二次改组蛋白酶基因筛选和序列分析 | 第79-80页 |
| 3.3 重组毕赤酵母酶活分析 | 第80页 |
| 3.4 改组蛋白酶酶学性质分析 | 第80-82页 |
| 4 讨论 | 第82-83页 |
| 5 小结 | 第83-84页 |
| 第七章 发酵羽毛粉营养指标测定 | 第84-88页 |
| 1 材料和方法 | 第84-85页 |
| 1.1 羽毛粉培养基 | 第84页 |
| 1.2 发酵羽毛粉（fermented feather meal，简称FFM）制备 | 第84页 |
| 1.3 试验方法 | 第84页 |
| 1.4 指标测定 | 第84-85页 |
| 1.5 统计分析 | 第85页 |
| 2 结果与分析 | 第85页 |
| 2.1 发酵羽毛粉营养物质表观代谢率 | 第85页 |
| 2.2 发酵羽毛粉玉米混合物氨基酸含量分析 | 第85页 |
| 3 讨论 | 第85-87页 |
| 4 小结 | 第87-88页 |
| 第八章 不同发酵处理羽毛粉对肉鸡生产性能的影响 | 第88-110页 |
| 1 材料与方法 | 第88-94页 |
| 1.1 试验菌株及试剂 | 第88页 |
| 1.2 发酵羽毛粉(FFM)制备 | 第88页 |
| 1.3 试验设计与分组 | 第88-89页 |
| 1.4 试验日粮 | 第89-90页 |
| 1.5 饲养管理 | 第90-91页 |
| 1.6 测定指标及方法 | 第91-94页 |
| 1.7 数据统计和分析 | 第94页 |
| 2 结果与分析 | 第94-106页 |
| 2.1 日粮中添加发酵羽毛粉对黄羽肉鸡生产性能的影响 | 第94-95页 |
| 2.2 日粮中添加发酵羽毛粉对黄羽肉鸡营养物质代谢率的影响 | 第95-96页 |
| 2.3 日粮中添加发酵羽毛粉对黄羽肉鸡屠宰性能的影响 | 第96-98页 |
| 2.4 日粮中添加发酵羽毛粉对黄羽肉鸡肌肉品质的影响 | 第98页 |
| 2.5 日粮中添加发酵羽毛粉对黄羽肉鸡肠道微生物数量和消化性酶活力的影响 | 第98-99页 |
| 2.6 日粮中添加发酵羽毛粉对黄羽肉鸡肠道微生物区系的影响 | 第99-103页 |
| 2.7 日粮中添加发酵羽毛粉对黄羽肉鸡血清指标的影响 | 第103-105页 |
| 2.8 日粮中添加发酵羽毛粉代替鱼粉经济效益分析 | 第105-106页 |
| 3 讨论 | 第106-108页 |
| 3.1 发酵羽毛粉对黄羽肉鸡生长性能的影响 | 第106-107页 |
| 3.2 发酵羽毛粉对黄羽肉鸡营养物质代谢的影响 | 第107页 |
| 3.3 发酵羽毛粉对黄羽肉鸡屠宰性能和肉品质的影响 | 第107页 |
| 3.4 发酵羽毛粉对黄羽肉鸡肠道消化酶活力的影响 | 第107页 |
| 3.5 发酵羽毛粉对黄羽肉鸡肠道微生物的影响 | 第107-108页 |
| 3.6 发酵羽毛粉对黄羽肉鸡血液生化指标的影响 | 第108页 |
| 3.7 日粮中添加发酵羽毛粉替代鱼粉经济效益分析 | 第108页 |
| 4 小结 | 第108-110页 |
| 全文总结 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-120页 |
