| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 犬乳腺肿瘤研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2 抑癌基因PTEN | 第12-15页 |
| 1.2.1 PTEN的结构和功能 | 第12页 |
| 1.2.2 PTEN的作用机制 | 第12-13页 |
| 1.2.3 PTEN的调控 | 第13-14页 |
| 1.2.4 PTEN与肿瘤 | 第14-15页 |
| 1.3 PI3K/Akt通路与肿瘤 | 第15-16页 |
| 1.4 本实验研究目的及意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-20页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和细胞系 | 第17页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第17页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第17-19页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-32页 |
| 2.2.1 犬乳腺肿瘤细胞的复苏、传代与冻存 | 第20-21页 |
| 2.2.2 犬PTEN基因克隆 | 第21-23页 |
| 2.2.3 pc DNA3.1-PTEN重组质粒构建 | 第23-25页 |
| 2.2.4 稳定表达PTEN蛋白细胞系的建立 | 第25-29页 |
| 2.2.5 PTEN过表达对CHMp和CHMm细胞增殖的影响 | 第29页 |
| 2.2.6 PTEN过表达对CHMp和CHMm细胞凋亡的影响 | 第29页 |
| 2.2.7 PTEN过表达对CHMp和CHMm细胞中PI3K/Akt信号通路及下游相关mRNA表达的影响 | 第29-30页 |
| 2.2.8 PTEN过表达对CHMp和CHMm细胞中PI3K/Akt信号通路及下游相关蛋白表达的影响 | 第30-31页 |
| 2.2.9 实验数据的分析与统计 | 第31-32页 |
| 3 实验结果 | 第32-50页 |
| 3.1 犬PTEN真核表达载体的构建 | 第32-34页 |
| 3.1.1 RT-PCR扩增犬PTEN基因片段 | 第32-33页 |
| 3.1.2 pc DNA3.1(+)载体与目的基因连接转化结果 | 第33页 |
| 3.1.3 重组质粒pcDNA3.1-PTEN的双酶切结果 | 第33-34页 |
| 3.1.4 重组质粒pcDNA3.1-PTEN的测序结果 | 第34页 |
| 3.2 转染的CHMp和CHMm细胞PTEN的表达 | 第34-36页 |
| 3.2.1 Real-time PCR检测转染细胞中PTEN mRNA的表达 | 第34-35页 |
| 3.2.2 Western blot检测转染细胞中PTEN蛋白的表达 | 第35-36页 |
| 3.3 PTEN过表达对CHMp和CHMm细胞增殖的影响 | 第36-37页 |
| 3.4 PTEN过表达对CHMp和CHMm细胞凋亡的影响 | 第37-39页 |
| 3.5 PTEN过表达对CHMp和CHMm细胞中PI3K/Akt信号通路及下游相关因子表达的影响 | 第39-50页 |
| 3.5.1 PTEN过表达对CHMp和CHMm细胞中PI3K/Akt信号通路的影响 | 第39-42页 |
| 3.5.2 PTEN过表达对CHMp和CHMm细胞凋亡因子Bcl-2、Bax、caspase-3 和caspase-9 表达的影响 | 第42-47页 |
| 3.5.3 PTEN过表达对CHMp和CHMm细胞周期因子P27kip和Cyclin D1表达的影响 | 第47-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| 4.1 犬PTEN蛋白在犬乳腺肿瘤细胞的表达 | 第50页 |
| 4.2 PTEN过表达抑制犬乳腺肿瘤细胞增殖并促进其凋亡 | 第50-51页 |
| 4.3 PTEN过表达能下调PI3K/Akt信号通路 | 第51-52页 |
| 4.4 PTEN过表达下调PI3K/Akt信号通路调控细胞凋亡因子 | 第52-53页 |
| 4.5 PTEN过表达下调PI3K/Akt信号通路调控细胞周期因子 | 第53-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第63页 |
