| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1.1 高等植物启动子概述 | 第13-20页 |
| 1.1.1 高等植物启动子的概念 | 第13页 |
| 1.1.2 真核植物启动子的结构 | 第13-15页 |
| 1.1.3 启动子的分类 | 第15-20页 |
| 1.2 启动子的功能研究方法 | 第20-23页 |
| 1.2.1 启动子生物信息学分析 | 第20-21页 |
| 1.2.2 点突变分析 | 第21-22页 |
| 1.2.3 酵母单杂交技术 | 第22页 |
| 1.2.4 染色体免疫共沉淀法 | 第22页 |
| 1.2.5 凝胶阻滞分析实验(EMSA) | 第22页 |
| 1.2.6 瞬时表达分析 | 第22-23页 |
| 1.2.7 稳定表达分析 | 第23页 |
| 1.2.8 缺失体分析 | 第23页 |
| 1.2.9 常用报告基因 | 第23页 |
| 1.3 花色相关基因启动子的研究进展 | 第23-25页 |
| 1.3.1 查尔酮合成酶(CHS) | 第24页 |
| 1.3.2 查尔酮异构酶基因(CHI) | 第24页 |
| 1.3.3 氢黄酮醇还原酶基因(DFR) | 第24-25页 |
| 1.3.4 花青素合成酶(ANS) | 第25页 |
| 1.3.5 类黄酮3’5’羟化酶基因(F3’5’H) | 第25页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 1.5 实验技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 ANS基因启动子的克隆与缺失融合载体的构建 | 第27-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 菌株与克隆载体 | 第27页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4 常用培养基的配置方法 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-34页 |
| 2.2.1 垂花百合基因组DNA的提取及纯化 | 第29页 |
| 2.2.2 特异性引物的设计 | 第29页 |
| 2.2.3 启动子序列的获得 | 第29-31页 |
| 2.2.4 获得ANS基因启动子缺失片段 | 第31-33页 |
| 2.2.5 缺失载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-39页 |
| 2.3.1 垂花百合基因组DNA的提取 | 第34页 |
| 2.3.2 染色体步移法克隆ANS基因启动子 | 第34-35页 |
| 2.3.3 ANS基因启动子5’端缺失片段的克隆 | 第35-37页 |
| 2.3.4 pMD18T-ANSpQ(1～5)重组质粒的酶切验证 | 第37-38页 |
| 2.3.5 重组表达载体的构建及检测 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 LcANSp基因启动子及缺失体在拟南芥中的遗传转化 | 第41-53页 |
| 3.1 材料 | 第41页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第41页 |
| 3.1.2 菌株与质粒 | 第41页 |
| 3.1.3 试剂及仪器 | 第41页 |
| 3.2 方法 | 第41-45页 |
| 3.2.1 农杆菌工程菌的构建与鉴定 | 第41-43页 |
| 3.2.2 野生型拟南芥种子对硫酸卡那霉素(Kan)的敏感性检测 | 第43页 |
| 3.2.3 倒置浸花法转化拟南芥 | 第43-44页 |
| 3.2.4 硫酸卡那霉素筛选T_0代种子 | 第44-45页 |
| 3.2.5 T_0代抗性植株的PCR检测 | 第45页 |
| 3.2.6 T_2代抗性植株的获得 | 第45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-51页 |
| 3.3.1 植物表达载体转化农杆菌 | 第45-46页 |
| 3.3.2 农杆菌工程菌的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.3 野生型拟南芥对硫酸卡那霉素(Kan)的敏感性检测 | 第47-49页 |
| 3.3.4 T_0代转基因拟南芥的Kan抗性筛选 | 第49-50页 |
| 3.3.5 T_0代转基因拟南芥的PCR检测 | 第50-51页 |
| 3.3.6 T_2代转基因拟南芥的筛选 | 第51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 LcANSp启动子EMSA分析 | 第53-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第53页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第53页 |
| 4.1.2 菌株与克隆载体 | 第53页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第53页 |
| 4.1.4 实验器材 | 第53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-57页 |
| 4.2.1 获得启动子片段 | 第53-54页 |
| 4.2.2 提取垂花百合花被片核蛋白 | 第54页 |
| 4.2.3 P1-P5系列DNA探针的标记 | 第54-55页 |
| 4.2.4 生物素标记探针标记效率的检测 | 第55页 |
| 4.2.5 EMSA胶的配制 | 第55-56页 |
| 4.2.6 EMSA结合反应 | 第56页 |
| 4.2.7 电泳 | 第56页 |
| 4.2.8 转膜 | 第56-57页 |
| 4.2.9 交联 | 第57页 |
| 4.2.10 化学发光检测 | 第57页 |
| 4.3 结果与分析 | 第57-58页 |
| 4.3.1 探针制备结果 | 第57页 |
| 4.3.2 垂花百合核蛋白与LcANSp启动子EMSA分析 | 第57-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 附录 | 第70-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第81-82页 |
