| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 玉米赤霉烯酮 | 第12-17页 |
| 1.1.1 概述 | 第12页 |
| 1.1.2 玉米赤霉烯酮的分布及危害 | 第12-13页 |
| 1.1.3 玉米赤霉烯酮的毒理研究 | 第13-14页 |
| 1.1.4 玉米赤霉烯酮的检测方法及控制策略 | 第14-17页 |
| 1.2 ZEN的脱毒 | 第17-19页 |
| 1.2.1 ZEN的脱毒方法 | 第17-18页 |
| 1.2.2 ZEN生物脱毒的国内外研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3 毕赤酵母表达系统 | 第19-21页 |
| 1.3.1 毕赤酵母表达系统的优势 | 第19-20页 |
| 1.3.2 毕赤酵母的宿主菌选择 | 第20页 |
| 1.3.3 毕赤酵母表达载体的选择 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究的意义和主要内容 | 第21-24页 |
| 1.4.1 研究背景与意义 | 第21-22页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第22-23页 |
| 1.4.3 技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 重组质粒pPIC9K-A4-Oxa的构建 | 第24-37页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.2.1 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.2.2 质粒与菌株 | 第24-25页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第25页 |
| 2.2.4 培养基与溶液 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-31页 |
| 2.3.1 细菌的培养 | 第26页 |
| 2.3.2 大肠杆菌质粒的提取 | 第26-27页 |
| 2.3.3 引物设计与合成 | 第27页 |
| 2.3.4 目的基因的扩增 | 第27-28页 |
| 2.3.5 PCR产物的纯化回收 | 第28-29页 |
| 2.3.6 酶切与回收试验 | 第29页 |
| 2.3.7 目的基因与载体的体外连接 | 第29-30页 |
| 2.3.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 2.3.9 化学法转化大肠杆菌 | 第30页 |
| 2.3.10 重组子的筛选与鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第31-36页 |
| 2.4.1 目的基因的扩增 | 第31-34页 |
| 2.4.2 重组质粒的构建 | 第34-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 重组蛋白A4-Oxa在毕赤酵母中的分泌表达及优化 | 第37-55页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-40页 |
| 3.2.1 主要仪器设备 | 第37页 |
| 3.2.2 菌株 | 第37-38页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第38页 |
| 3.2.4 培养基与溶液 | 第38-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-43页 |
| 3.3.1 毕赤酵母转化 | 第40-41页 |
| 3.3.2 重组酵母的诱导表达 | 第41-42页 |
| 3.3.3 重组蛋白A4-Oxa的SDS-PAGE | 第42页 |
| 3.3.4 重组蛋白A4-Oxa的降解活性测定 | 第42页 |
| 3.3.5 重组蛋白A4-Oxa分泌表达的单因素优化 | 第42-43页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第43-53页 |
| 3.4.1 重组酵母转化子的菌落PCR鉴定 | 第43-45页 |
| 3.4.2 重组蛋白A4-Oxa的SDS-PAGE鉴定 | 第45-46页 |
| 3.4.3 重组蛋白A4-Oxa的降解活性检测 | 第46-48页 |
| 3.4.4 重组蛋白A4-Oxa的单因素优化实验 | 第48-53页 |
| 3.5 本章小结 | 第53-55页 |
| 第四章 ZEN降解产物初步分析及A4-Oxa的特性研究 | 第55-71页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.2.1 主要仪器设备 | 第55-56页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第56页 |
| 4.2.3 常用溶液的配制 | 第56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-59页 |
| 4.3.1 MCF-7 乳腺癌细胞增殖试验 | 第56-57页 |
| 4.3.2 产物分析 | 第57-58页 |
| 4.3.3 不同温度下菌体吸附对ZEN降解的影响 | 第58-59页 |
| 4.3.4 不同pH下菌体吸附对ZEN降解的影响 | 第59页 |
| 4.3.5 A4-Oxa蛋白酶氧化酶活的测定 | 第59页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第59-69页 |
| 4.4.1 MCF-7 乳腺癌细胞增殖试验 | 第59-61页 |
| 4.4.2 产物分析 | 第61-63页 |
| 4.4.3 不同温度对ZEN降解的影响 | 第63-66页 |
| 4.4.4 不同pH对ZEN降解的影响 | 第66-69页 |
| 4.4.5 A4-Oxa蛋白酶氧化酶活的测定 | 第69页 |
| 4.5 本章小结 | 第69-71页 |
| 结论与展望 | 第71-74页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 本论文的创新之处 | 第72-73页 |
| 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 附表 | 第84页 |
