| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-28页 |
| ·引言 | 第10页 |
| ·透皮给药 | 第10-13页 |
| ·透皮给药的定义 | 第10页 |
| ·透皮给药的优点 | 第10-11页 |
| ·透皮给药的机理及影响因素 | 第11-13页 |
| ·皮肤 | 第11-12页 |
| ·皮肤的附属结构 | 第12页 |
| ·透皮的影响因素 | 第12-13页 |
| ·常用的透皮技术 | 第13页 |
| ·透皮增强肽TD1 | 第13-16页 |
| ·TD1 的发现 | 第13-14页 |
| ·TD1 的作用机理 | 第14-15页 |
| ·TD1 已有的相关研究与应用进展 | 第15-16页 |
| ·表皮生长因子（EGF） | 第16-23页 |
| ·EGF 的发现 | 第16页 |
| ·EGF 的结构 | 第16-17页 |
| ·EGF 的信号转导 | 第17-20页 |
| ·EGF 的受体（EGFR） | 第17-18页 |
| ·EGF 信号转导途径 | 第18-20页 |
| ·EGF 的生物学功能与应用 | 第20-23页 |
| ·细胞保护作用 | 第20页 |
| ·酸性抑制作用 | 第20-21页 |
| ·营养作用 | 第21页 |
| ·促细胞增殖作用 | 第21页 |
| ·损伤修复作用 | 第21-22页 |
| ·美容学作用 | 第22-23页 |
| ·EGF 与癌症 | 第23-24页 |
| ·蛋白质分离纯化方法 | 第24-25页 |
| ·引言 | 第24页 |
| ·沉淀法 | 第24页 |
| ·盐析法 | 第24页 |
| ·有机溶剂沉淀法 | 第24页 |
| ·蛋白质沉淀法 | 第24页 |
| ·电泳法 | 第24页 |
| ·透析法 | 第24页 |
| ·层析法 | 第24-25页 |
| ·吸附层析 | 第25页 |
| ·离子交换层析 | 第25页 |
| ·凝胶过滤 | 第25页 |
| ·亲和层析 | 第25页 |
| ·气相色谱 | 第25页 |
| ·高效液相色谱 | 第25页 |
| ·常用的蛋白表达纯化系统 | 第25-28页 |
| ·GST 标签的蛋白表达纯化系统 | 第25-26页 |
| ·His 标签的蛋白表达纯化系统 | 第26页 |
| ·Halo-Tag~（TM） 表达纯化系统 | 第26-28页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第28-38页 |
| ·实验材料 | 第28-32页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第28-29页 |
| ·主要的实验对象 | 第29页 |
| ·引物、质粒和菌株 | 第29页 |
| ·细胞与实验动物 | 第29页 |
| ·主要的实验试剂 | 第29-30页 |
| ·分子生物学相关试剂 | 第29页 |
| ·细胞培养相关试剂 | 第29页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第29-30页 |
| ·抗体 | 第30页 |
| ·常用试剂的配置 | 第30-31页 |
| ·Tricine 蛋白胶与SDS-PAGE 胶的配置 | 第31-32页 |
| ·Tricine 蛋白胶配方 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE 胶配方 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-38页 |
| ·分子生物学实验 | 第32-34页 |
| ·PCR 反应 | 第32页 |
| ·酶切与连接 | 第32-33页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第33页 |
| ·小量质粒抽提 | 第33页 |
| ·琼脂糖凝胶回收DNA | 第33-34页 |
| ·Halo-Tag~（TM）融合蛋白表达与纯化 | 第34-35页 |
| ·Halo-Tag~（TM） 融合蛋白诱导表达 | 第34页 |
| ·Halo-Tag~（TM） 融合蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| ·细胞生物学实验 | 第35-36页 |
| ·细胞培养 | 第35页 |
| ·MTT 实验 | 第35-36页 |
| ·细胞迁移划线实验 | 第36页 |
| ·ERK1/2 激活实验 | 第36页 |
| ·Western Blotting 实验 | 第36页 |
| ·蛋白鉴定实验 | 第36-37页 |
| ·氨基酸序列、紫外吸收峰检测实验 | 第36页 |
| ·蛋白稳定性鉴定实验 | 第36-37页 |
| ·动物学实验 | 第37页 |
| ·皮肤处理 | 第37页 |
| ·剥离皮肤 | 第37页 |
| ·体外透皮实验 | 第37页 |
| ·体内透皮实验 | 第37页 |
| ·数据处理 | 第37-38页 |
| 第三章 实验过程与结果 | 第38-53页 |
| ·引言 | 第38-39页 |
| ·TD-1-EGF 质粒构建、蛋白表达与纯化 | 第39-42页 |
| ·PCR 反应连接TD1 与EGF | 第39-40页 |
| ·PCR 产物（TD1-EGF）连接Halo-TagTM 载体 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白TD1-EGF 的诱导表达与检测 | 第41页 |
| ·TD1-EGF 的纯化与检测 | 第41-42页 |
| ·TD1-EGF 蛋白的理化性质鉴定 | 第42-46页 |
| ·分子筛进一步纯化 | 第42-43页 |
| ·质谱检测氨基酸序列 | 第43-44页 |
| ·TD1-EGF 紫外吸收峰的检测 | 第44页 |
| ·动态光散射检测均一性 | 第44-45页 |
| ·热稳定性检测 | 第45-46页 |
| ·TD1-EGF/EGF 的细胞活性检测 | 第46-48页 |
| ·促细胞生长活性检测 | 第46页 |
| ·促细胞迁移活性检测 | 第46-48页 |
| ·刺激ERD1/2 磷酸化激活活性检测 | 第48页 |
| ·TD1-EGF/EGF 的透皮活性检测 | 第48-53页 |
| ·体外透皮的时间依赖性检测 | 第49页 |
| ·体外透皮的温度依赖性检测 | 第49-50页 |
| ·体外透皮的浓度依赖性检测 | 第50-51页 |
| ·体内透皮活性检测 | 第51-53页 |
| 第四章 结果分析与讨论 | 第53-57页 |
| ·实验结果分析 | 第53-55页 |
| ·小结与讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附录 1 常用缩略词 | 第63-66页 |
| 致谢 | 第66页 |