| 论文创新点 | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第6-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第15-30页 |
| 1. 兴奋性氨基酸转载体EAAC1 | 第15-26页 |
| 1.1 EAAC1的功能 | 第15-20页 |
| 1.1.1 EAAC1抵抗谷氨酸兴奋性毒性的局限性 | 第16-18页 |
| 1.1.2 EAAC1具有优秀的抗氧化功能 | 第18-20页 |
| 1.2 EAAC1的异常分布与疾病治疗 | 第20-23页 |
| 1.2.1 脑缺血疾病中EAAC1在OPCs里适应性表达 | 第20-21页 |
| 1.2.2 多发性硬化症中EAAC1在星形胶质细胞里适应性表达 | 第21-23页 |
| 1.3 EAAC1的信号通路调控机制 | 第23-26页 |
| 2 雌激素 | 第26-30页 |
| 2.1 雌激素在多发性硬化症中的保护作用 | 第26-28页 |
| 2.2 雌激素调控EAAC1表达的假设机制 | 第28-30页 |
| 第二章 雌激素通过GPR30上调EAAC1抵抗双氧水毒性 | 第30-55页 |
| 1 引言 | 第30页 |
| 2 双氧水毒性模型的建立 | 第30-36页 |
| 2.1 MTT实验原理 | 第30-31页 |
| 2.2 实验材料 | 第31-33页 |
| 2.2.1 细胞系 | 第31页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第31-32页 |
| 2.2.3 实验耗材与仪器 | 第32页 |
| 2.2.4 主要溶剂的配制 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法与步骤 | 第33-36页 |
| 2.3.1 细胞复苏 | 第33-34页 |
| 2.3.2 细胞培养和传代 | 第34页 |
| 2.3.3 细胞冻存 | 第34-35页 |
| 2.3.4 细胞计数 | 第35-36页 |
| 2.3.5 建立双氧水毒性模型 | 第36页 |
| 3 EAAC1在C6耐受双氧水压力中的作用 | 第36-43页 |
| 3.1 实验原理 | 第36-37页 |
| 3.1.1 siRNA干扰原理 | 第36-37页 |
| 3.1.2 Western blots检测蛋白表达原理 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-40页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.2 实验耗材与仪器 | 第38页 |
| 3.2.3 主要溶剂的配制 | 第38-40页 |
| 3.3. 实验方法与步骤 | 第40-43页 |
| 3.3.1 siRNA脂质体转染 | 第40-41页 |
| 3.3.2 检测EAAC1蛋白表达水平 | 第41-43页 |
| 3.3.3 抑制EAAC1表达影响C6耐受双氧水压力的能力 | 第43页 |
| 4 雌激素及GPR30对EAAC1表达和双氧水毒性的影响 | 第43-46页 |
| 4.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第43页 |
| 4.1.2 实验耗材与仪器 | 第43页 |
| 4.1.3 主要溶剂的配制 | 第43页 |
| 4.2 实验方法与步骤 | 第43-46页 |
| 4.2.1 检测E2对EAAC1蛋白表达的影响 | 第43-44页 |
| 4.2.2 确定EAAC1对E2抵抗H_2O_2毒性的影响 | 第44页 |
| 4.2.3 确定受体在E2调节EAAC1表达中的作用 | 第44-45页 |
| 4.2.4 确定GPR30对E2抵抗H_2O_2毒性的影响 | 第45页 |
| 4.2.5 在C6细胞中检测GPR30 | 第45-46页 |
| 5 实验结果 | 第46-50页 |
| 5.1 H_2O_2毒性模型的建立 | 第46页 |
| 5.2 下调EAAC1的表达抑制C6对H_2O_2的耐受力 | 第46-47页 |
| 5.3 雌激素上调EAAC1对抗H_2O_2毒性 | 第47-48页 |
| 5.4 E2通过GPR30和ERβ上调EAAC1 | 第48-49页 |
| 5.5 E2通过GPR30抵抗H_2O_2毒性 | 第49-50页 |
| 6 讨论 | 第50-55页 |
| 第三章 雌激素通过激活Sphk1调控EAAC1蛋白表达 | 第55-74页 |
| 1 引言 | 第55-57页 |
| 1.1 鞘磷脂代谢与细胞凋亡、存活 | 第55-56页 |
| 1.2 一磷酸神经鞘氨醇与神经疾病 | 第56页 |
| 1.3 鞘氨醇激酶Sphk1与Sphk2 | 第56-57页 |
| 2 E2通过GPR30激活Sphk1 | 第57-58页 |
| 2.1 实验试剂、耗材与仪器 | 第57-58页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第58页 |
| 3 S1P上凋EAAC1蛋白表达 | 第58-59页 |
| 3.1 实验试剂、耗材与仪器 | 第58页 |
| 3.2 主要溶剂的配制 | 第58-59页 |
| 3.3 实验方法与步骤 | 第59页 |
| 4 抑制Sphk1阻抑E2/G1对EAAC1的上调 | 第59-60页 |
| 4.1 实验试剂 | 第59页 |
| 4.2 主要溶剂的配制 | 第59页 |
| 4.3 实验方法与步骤 | 第59-60页 |
| 5 干扰Sphk1表达会抑制E2/G1对EAAC1的上调 | 第60-69页 |
| 5.1 pSuper-Sphk1 shRNA载体的构建 | 第60-69页 |
| 5.1.1 实验原理 | 第60-61页 |
| 5.1.2 实验材料 | 第61-64页 |
| 5.1.3 实验方法步骤 | 第64-69页 |
| 6 实验结果 | 第69-73页 |
| 6.1 E2通过GPR30激活Sphk1 | 第69-70页 |
| 6.2 E2通过Sphk1上调EAAC1蛋白表达水平 | 第70-73页 |
| 7 讨论 | 第73-74页 |
| 第四章 雌激素通过Sphk1转活FGFR-ERK信号通路调控EAAC1蛋白表达 | 第74-88页 |
| 1 雌激素依赖于FGF2上调EAAC1 | 第74-79页 |
| 1.1 引言 | 第74页 |
| 1.2 实验原理 | 第74页 |
| 1.3 实验材料 | 第74-75页 |
| 1.3.1 实验试剂 | 第75页 |
| 1.3.2 实验耗材与仪器 | 第75页 |
| 1.3.3 RNA干扰序列及Real Time PCR引物 | 第75页 |
| 1.4 实验方法与步骤 | 第75-77页 |
| 1.4.1 S1P影响C6细胞中FGF2的转录水平 | 第75-76页 |
| 1.4.2 Sphk1抑制剂影响E2对FGF2转录的调控 | 第76页 |
| 1.4.3 FGF2调节EAAC1蛋白表达 | 第76页 |
| 1.4.4 siFGF2影响E2/G1/S1P对EAAC1的上调 | 第76-77页 |
| 1.5 实验结果 | 第77-79页 |
| 2 雌激素通过Sphk1转活FGFR-ERK通路上调EAAC1 | 第79-85页 |
| 2.1 引言 | 第79页 |
| 2.2 实验材料 | 第79页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第79页 |
| 2.2.2 实验耗材、仪器与溶液配制 | 第79页 |
| 2.3 实验方法与步骤 | 第79-82页 |
| 2.3.1 FGF2影响FRS2α-ERK信号通路 | 第79-80页 |
| 2.3.2 抑制FRS2α-ERK信号通路影响EAAC1蛋白表达 | 第80页 |
| 2.3.3 GPR30抑制剂对FRS2α-ERK信号通路的影响 | 第80页 |
| 2.3.4 敲低Sphk1基因对FRS2α- ERK信号通路的影响 | 第80-81页 |
| 2.3.5 E2/G1/S1P激活FRS2α-ERK信号通路 | 第81页 |
| 2.3.6 E2/G1/S1P激活FRS2α-ERK诱导EAAC1表达 | 第81-82页 |
| 2.4 实验结果 | 第82-85页 |
| 2.4.1 FGF2激活FRS2α-ERK上调EAAC1表达 | 第82-83页 |
| 2.4.2 E2通过Sphk1转活FRS2α-ERK促进EAAC1表达 | 第83-85页 |
| 3 讨论 | 第85-88页 |
| 第五章 总结与展望 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-103页 |
| 博士期间发表论文 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
