| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-27页 |
| 第一章 弧菌及其毒力因子研究进展 | 第13-21页 |
| 1 副溶血弧菌 | 第13-16页 |
| 1.1 溶血素 | 第13-14页 |
| 1.1.1 耐热直接溶血素 | 第14页 |
| 1.1.2 耐热相关溶血素 | 第14页 |
| 1.1.3 不耐热溶血素 | 第14页 |
| 1.2 Ⅲ型分泌系统 | 第14-15页 |
| 1.3 尿素酶 | 第15页 |
| 1.4 黏附相关因子 | 第15页 |
| 1.5 其他毒力因子 | 第15-16页 |
| 2 霍乱弧菌 | 第16-17页 |
| 2.1 霍乱毒素 | 第16页 |
| 2.2 毒素协同菌毛 | 第16-17页 |
| 2.3 凝血素 | 第17页 |
| 3 创伤弧菌 | 第17-18页 |
| 3.1 创伤弧菌溶细胞素 | 第17页 |
| 3.2 金属蛋白酶 | 第17-18页 |
| 3.3 其他毒力因子 | 第18页 |
| 4 拟态弧菌 | 第18-19页 |
| 4.1 溶血素 | 第18页 |
| 4.2 黏附素 | 第18-19页 |
| 4.3 外毒素 | 第19页 |
| 5 溶藻弧菌 | 第19-21页 |
| 5.1 胶原蛋白酶 | 第19页 |
| 5.2 碱性丝氨酸蛋白酶 | 第19页 |
| 5.3 铁摄取调控系统 | 第19-21页 |
| 第二章 弧菌的检测方法进展 | 第21-27页 |
| 1 传统的检测鉴定方法 | 第21-22页 |
| 2 免疫学方法 | 第22-23页 |
| 2.1 酶联免疫吸附 | 第22页 |
| 2.2 免疫胶体金层析技术 | 第22-23页 |
| 2.3 蛋白质印迹法(Western Blot) | 第23页 |
| 2.4 免疫荧光技术 | 第23页 |
| 3 基因芯片技术 | 第23页 |
| 4 聚合酶链式反应(PCR)技术 | 第23-25页 |
| 4.1 常规PCR技术 | 第24页 |
| 4.2 多重PCR法 | 第24页 |
| 4.3 环介导等温扩增技术(LAMP) | 第24-25页 |
| 4.4 实时荧光定量PCR技术 | 第25页 |
| 5 小结 | 第25-27页 |
| 第二篇 试验研究 | 第27-77页 |
| 第三章 副溶血弧菌多重荧光定量PCR检测方法的建立 | 第27-45页 |
| 1 材料与方法 | 第27-34页 |
| 1.1 材料 | 第27-28页 |
| 1.1.1 菌种 | 第27-28页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 1.2 方法 | 第28-34页 |
| 1.2.1 引物及探针的设计与合成 | 第28-29页 |
| 1.2.2 DNA的提取 | 第29页 |
| 1.2.3 三重实时荧光定量PCR阳性标准品的制备 | 第29-32页 |
| 1.2.4 副溶血弧菌单重荧光定量PCR方法的建立 | 第32-33页 |
| 1.2.5 副溶血弧菌三重荧光定量PCR检测方法的建立 | 第33页 |
| 1.2.6 样品的检测 | 第33-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-43页 |
| 2.1 目的片段的PCR扩增 | 第34页 |
| 2.2 重组质粒PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3 重组质粒制备及浓度测定 | 第35页 |
| 2.4 副溶血弧菌单重荧光定量PCR方法的建立 | 第35-39页 |
| 2.4.1 单重荧光定量PCR标准曲线 | 第35-36页 |
| 2.4.2 单重荧光定量PCR特异性 | 第36-37页 |
| 2.4.3 单重荧光定量PCR敏感性 | 第37-39页 |
| 2.5 副溶血弧菌三重荧光定量PCR检测方法的建立 | 第39-43页 |
| 2.5.1 三重荧光定量PCR反应体系及条件 | 第39页 |
| 2.5.2 三重荧光定量PCR标准曲线 | 第39-41页 |
| 2.5.3 三重荧光定量PCR的特异性 | 第41-42页 |
| 2.5.4 三重荧光定量PCR的灵敏度 | 第42-43页 |
| 2.5.5 三重荧光定量PCR的重复性 | 第43页 |
| 2.6 样品检测 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 霍乱弧菌多重荧光定量PCR检测方法建立 | 第45-61页 |
| 1 材料与方法 | 第46-49页 |
| 1.1 材料 | 第46页 |
| 1.1.1 菌种 | 第46页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第46页 |
| 1.2 方法 | 第46-49页 |
| 1.2.1 引物及探针的设计与合成 | 第46-47页 |
| 1.2.2 基因组的提取 | 第47页 |
| 1.2.3 三重实时荧光定量PCR阳性标准品的制备 | 第47页 |
| 1.2.4 霍乱弧菌单重荧光定量PCR方法建立 | 第47-48页 |
| 1.2.5 霍乱弧菌三重实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第48-49页 |
| 1.2.6 样品检测 | 第49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-59页 |
| 2.1 目的片段的PCR扩增 | 第49页 |
| 2.2 重组质粒PCR鉴定 | 第49-50页 |
| 2.3 重组质粒制备及浓度测定 | 第50页 |
| 2.4 霍乱弧菌单重荧光定量PCR方法的建立 | 第50-55页 |
| 2.4.1 单重荧光定量PCR标准曲线 | 第50-52页 |
| 2.4.2 单重荧光定量PCR特异性 | 第52-53页 |
| 2.4.3 单重荧光定量PCR敏感性 | 第53-55页 |
| 2.5 霍乱弧菌三重荧光定量PCR检测方法的建立 | 第55-58页 |
| 2.5.1 三重荧光定量PCR反应体系及条件 | 第55页 |
| 2.5.2 三重荧光定量PCR标准曲线 | 第55-56页 |
| 2.5.3 三重荧光定量PCR特异性 | 第56-57页 |
| 2.5.4 三重荧光定量PCR敏感性 | 第57-58页 |
| 2.5.5 霍乱弧菌三重荧光定量PCR重复性检测 | 第58页 |
| 2.6 样品检测 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 创伤弧菌、拟态弧菌和溶藻弧菌多重荧光定量PCR检测方法的建立 | 第61-77页 |
| 1 材料与方法 | 第62-64页 |
| 1.1 材料 | 第62页 |
| 1.1.1 菌种 | 第62页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第62页 |
| 1.2 方法 | 第62-64页 |
| 1.2.1 引物及探针的设计与合成 | 第62-63页 |
| 1.2.2 基因组的提取 | 第63页 |
| 1.2.3 三重实时荧光定量PCR阳性标准品的制备 | 第63页 |
| 1.2.4 创伤弧菌、拟态弧菌及溶藻弧菌单重荧光定量PCR方法的建立 | 第63页 |
| 1.2.5 创伤弧菌、拟态弧菌和溶藻弧菌三重荧光定量PCR方法的建立 | 第63-64页 |
| 1.2.6 样品检测 | 第64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-75页 |
| 2.1 目的片段的PCR扩增 | 第64-65页 |
| 2.2 重组质粒PCR鉴定 | 第65页 |
| 2.3 重组质粒制备及浓度测定 | 第65-66页 |
| 2.4 创伤弧菌、拟态弧菌及溶藻弧菌单重荧光定量PCR方法的建立 | 第66-70页 |
| 2.4.1 单重荧光定量PCR标准曲线 | 第66-67页 |
| 2.4.2 单重荧光定量PCR敏感性 | 第67-69页 |
| 2.4.3 单重荧光定量PCR特异性 | 第69-70页 |
| 2.5 创伤弧菌、拟态弧菌和溶藻弧菌三重荧光定量PCR检测方法的建立 | 第70-75页 |
| 2.5.1 三重荧光定量PCR反应体系及条件的确定 | 第70-71页 |
| 2.5.2 三重荧光定量PCR标准曲线 | 第71-72页 |
| 2.5.3 三重实时荧光定量PCR特异性 | 第72-73页 |
| 2.5.4 三重实时荧光定量PCR敏感性的检测 | 第73-74页 |
| 2.5.5 三重实时荧光定量PCR重复性 | 第74-75页 |
| 2.6 样品检测 | 第75页 |
| 3 讨论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-88页 |
| 全文总结 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
