| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1 成肌分化 | 第12-19页 |
| 1.1 胚胎成肌过程 | 第12页 |
| 1.2 胚胎成肌分化调控 | 第12-15页 |
| 1.3 卫星细胞分化过程和调控 | 第15-18页 |
| 1.4 HDACS与成肌分化 | 第18-19页 |
| 2 ADP的结构及其功能 | 第19-23页 |
| 2.1 ADP概述 | 第19-21页 |
| 2.2 WD40结构域 | 第21页 |
| 2.3 TPR结构域 | 第21-22页 |
| 2.4 ADP的功能 | 第22-23页 |
| 3 TNF-α与成肌分化 | 第23-24页 |
| 4 研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第25-43页 |
| 1 实验材料 | 第25-30页 |
| 1.1 实验细胞 | 第25页 |
| 1.2 载体和菌株 | 第25页 |
| 1.3 主要仪器及厂家 | 第25-26页 |
| 1.4 主要试剂 | 第26-27页 |
| 1.4.1 载体构建相关试剂 | 第26页 |
| 1.4.2 细胞相关试剂 | 第26页 |
| 1.4.3 RNA相关试剂 | 第26-27页 |
| 1.4.4 蛋白相关试剂 | 第27页 |
| 1.5 主要溶液配制 | 第27-30页 |
| 1.5.1 常用培养基 | 第27-28页 |
| 1.5.2 制备感受态相关试剂配制 | 第28页 |
| 1.5.3 琼脂糖电泳相关溶液配制 | 第28页 |
| 1.5.4 质粒抽提相关溶液配制 | 第28页 |
| 1.5.5 细胞培养相关试剂配制 | 第28-29页 |
| 1.5.6 Western blot相关溶液配制 | 第29页 |
| 1.5.7 细胞免疫染色相关溶液配制 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-43页 |
| 2.1 基因克隆 | 第30-36页 |
| 2.1.1 CDS模板序列的制备 | 第30-31页 |
| 2.1.2 AT克隆 | 第31-34页 |
| 2.1.3 真核表达载体的构建 | 第34-36页 |
| 2.2 细胞培养和转染 | 第36-38页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第36-37页 |
| 2.2.2 瞬时转染 | 第37页 |
| 2.2.3 Adp稳定转染C2C12细胞筛选 | 第37-38页 |
| 2.3 细胞分化 | 第38页 |
| 2.3.0 C2C12细胞分化 | 第38页 |
| 2.3.1 稳转adp的C2C12细胞分化 | 第38页 |
| 2.3.2 加TNF-α稳转adp的C2C12细胞分化 | 第38页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR | 第38-40页 |
| 2.5 Western Blot | 第40-41页 |
| 2.5.1 蛋白质样品的制备 | 第40页 |
| 2.5.2 SDS-PAGE电泳 | 第40页 |
| 2.5.3 转膜 | 第40-41页 |
| 2.5.4 杂抗体 | 第41页 |
| 2.6 免疫荧光染色 | 第41页 |
| 2.7 基因敲减方法 | 第41-42页 |
| 2.8 分子生物学及相关软件 | 第42-43页 |
| 2.8.1 Primer Premier 5.0及Oligo 6进行引物设计及酶切位点确认 | 第42页 |
| 2.8.2 GraphPad Prism 5及CFX manager数据处理软件 | 第42-43页 |
| 第三章 结果和分析 | 第43-55页 |
| 1 ADP与C2C12成肌分化 | 第43-45页 |
| 1.1 C2C12细胞诱导分化 | 第43页 |
| 1.2 ADP以及成肌相关重要因子在C2C12分化过程中的表达 | 第43-45页 |
| 2 ADP对C2C12成肌分化的影响 | 第45-49页 |
| 2.1 Adp稳转C2C12细胞系检测 | 第45-46页 |
| 2.2 稳转细胞系诱导分化 | 第46-48页 |
| 2.3 ADP以及MHC在稳转细胞系分化过程中的表达 | 第48-49页 |
| 3 ADP对MyoG表达调控 | 第49-52页 |
| 3.1 成肌重要因子在稳转细胞分化过程中的表达 | 第49-50页 |
| 3.2 超表达ADP对MyoG表达的影响 | 第50-52页 |
| 3.3 敲减ADP后MyoG的表达情况 | 第52页 |
| 4 TNF-α对ADP介导的成肌分化调控 | 第52-55页 |
| 4.1 TNF-α对稳转细胞成肌分化过程中ADP和KLF15表达的影响 | 第52-53页 |
| 4.2 TNF-α对稳转细胞成肌分化的影响 | 第53-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-56页 |
| 第五章 结论、创新与不足之处 | 第56-58页 |
| 1 结论 | 第56页 |
| 2 创新 | 第56-57页 |
| 3 不足 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
