| 目录 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-17页 |
| 一、烟碱类农药的概述 | 第10-11页 |
| 二、吡虫啉(IMI)的代谢研究进展 | 第11-15页 |
| 1、动植物代谢 | 第11-12页 |
| 2、微生物共代谢IMI及其共代谢途径 | 第12-14页 |
| 3、吡虫啉硝基还原酶的研究 | 第14-15页 |
| 三、嗜麦芽寡养单胞菌的研究简介 | 第15页 |
| 四、本实验的设计思路及方法 | 第15-17页 |
| 第二章 E.coli DH10B代谢IMI及其降解条件的优化研究 | 第17-27页 |
| 1. 实验材料和方法 | 第17-19页 |
| ·实验材料 | 第17-18页 |
| ·菌种 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·相关试剂配制 | 第17-18页 |
| ·主要仪器和设备来源 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-19页 |
| ·菌种培养和保藏 | 第18页 |
| ·摇瓶培养和转化方法 | 第18页 |
| ·生物量的测定 | 第18页 |
| ·HPLC分析 | 第18-19页 |
| ·质谱分析 | 第19页 |
| 2. 实验结果 | 第19-25页 |
| ·E.coli DH10B代谢IMI的HPLC分析 | 第19-21页 |
| ·E.coli DH10B菌株静息转化IMI的降解曲线及urea IMI生成曲线 | 第21-22页 |
| ·不同温度对IMI降解的影响 | 第22页 |
| ·不同pH对IMI降解的影响 | 第22-23页 |
| ·不同有机酸作为共代谢物对IMI降解的影响 | 第23页 |
| ·不同溶氧量对IMI降解的影响 | 第23-24页 |
| ·不同琥珀酸钠浓度对IMI降解的影响 | 第24页 |
| ·E.coli DH10B代谢IMI及其降解条件的综合优化 | 第24-25页 |
| 3. 讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 E.coli DH10B的IMI硝基还原酶基因敲除研究 | 第27-39页 |
| 1. 实验材料和方法 | 第27-33页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·菌种和质粒 | 第27-28页 |
| ·培养基的配制 | 第28页 |
| ·相关试剂配制 | 第28-29页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-33页 |
| ·菌种培养和保藏 | 第29页 |
| ·PCR | 第29-31页 |
| ·大肠杆菌E.coli DH10B/pSC101电转感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·pSC101-BAD-ghaA介导的同源重组 | 第32页 |
| ·敲除相应基因的E.coli DH10B静息细胞转化 | 第32-33页 |
| ·HPLC活性检测 | 第33页 |
| 2. 实验结果 | 第33-38页 |
| ·钼蛋白抑制剂甲萘醌对IMI代谢的抑制 | 第33-34页 |
| ·YagR、XdhA和XdhD的生物信息学分析 | 第34-35页 |
| ·同源臂PCR | 第35-36页 |
| ·验证片段PCR | 第36-37页 |
| ·E.coli DH10B△YagR菌株IMI硝基还原及IMI降解能力检测 | 第37页 |
| ·E.coli DH10B△XdhA菌株IMI硝基还原及IMI降解能力检测 | 第37-38页 |
| 3. 讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 S.maltophilia R551-3 IMI硝基还原酶的表达质粒的构建和蛋白表达 | 第39-58页 |
| 1、实验材料和方法 | 第39-48页 |
| ·实验材料 | 第39-41页 |
| ·菌种和质粒 | 第39页 |
| ·培养基的配制 | 第39-40页 |
| ·相关试剂配制 | 第40页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第40-41页 |
| ·主要仪器设备及来源 | 第41页 |
| ·Marker分子量标准 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-48页 |
| ·菌种培养和保藏 | 第41页 |
| ·细菌基因组的提取 | 第41-42页 |
| ·质粒提取(碱变性法) | 第42-43页 |
| ·试剂盒提取基因组和质粒 | 第43页 |
| ·CaCl_2感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·PCR | 第43-44页 |
| ·PCR产物纯化 | 第44页 |
| ·DNA片段连接pMD18-T载体 | 第44页 |
| ·DNA片段连接pET-28a表达载体 | 第44-45页 |
| ·DNA片段双酶切及酶切片段回收 | 第45页 |
| ·菌落PCR | 第45页 |
| ·TA连接产物化转入E.coli DH10B | 第45-46页 |
| ·表达质粒化转入E.coli BL21(DE3) | 第46页 |
| ·目的蛋白诱导表达 | 第46页 |
| ·SDS-PAGE检测蛋白表达情况 | 第46-48页 |
| 2 实验结果 | 第48-56页 |
| ·S.maltophilia R551-3基因组的提取 | 第48页 |
| ·PCR扩增 | 第48-50页 |
| ·目的片段连TA阳性克隆筛选 | 第50-51页 |
| ·目的片段连pET-28a表达载体 | 第51-53页 |
| ·S maltophilia R551-3 IMI硝基还原酶的诱导表达 | 第53-56页 |
| 3. 讨论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 本文的创新与不足之处 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
