| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 晚疫病及其防治 | 第10-12页 |
| 1.1.1 晚疫病的致病菌 | 第10-11页 |
| 1.1.2 晚疫病的化学防治 | 第11-12页 |
| 1.1.3 晚疫病的生物防治 | 第12页 |
| 1.2 miRNA概述 | 第12-15页 |
| 1.2.1 miRNA的生成过程 | 第12-13页 |
| 1.2.2 miRNA的调控机制 | 第13-14页 |
| 1.2.3 miRNA的功能研究技术 | 第14-15页 |
| 1.3 病原物与番茄互作中miRNA的研究进展 | 第15-20页 |
| 1.3.1 病原物与番茄互作中miRNA的挖掘技术 | 第15页 |
| 1.3.2 病原物与番茄互作中的番茄miRNA | 第15-20页 |
| 1.3.3 病原物与番茄互作中的病原物miRNA | 第20页 |
| 1.4 amiRNA及其在番茄抗病中的应用 | 第20-21页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 致病疫霉中致病相关miRNA的预测及筛选 | 第22-30页 |
| 2.1 实验材料及仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 实验数据 | 第22页 |
| 2.1.2 预测软件 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 致病相关miRNA的预测 | 第23-24页 |
| 2.2.2 致病相关miRNA的靶基因预测 | 第24页 |
| 2.2.3 致病相关miRNA网络的构建 | 第24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-28页 |
| 2.3.1 致病相关的miRNA | 第24-27页 |
| 2.3.2 致病相关miRNA的靶基因 | 第27-28页 |
| 2.3.3 致病相关miRNA的关系网络图 | 第28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 2.5 小结 | 第29-30页 |
| 3 致病疫霉中致病相关miRNA的鉴定及表达特性分析 | 第30-38页 |
| 3.1 实验材料及仪器 | 第30-31页 |
| 3.1.1 预测软件 | 第30页 |
| 3.1.2 实验材料 | 第30页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第30-31页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 3.2.1 候选pi-miRNA的二级结构验证 | 第31页 |
| 3.2.2 处理后致病疫霉的收集 | 第31页 |
| 3.2.3 总RNA的提取 | 第31页 |
| 3.2.4 miRNA的反转录 | 第31-32页 |
| 3.2.5 miRNA的验证及表达模式分析 | 第32-33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-35页 |
| 3.3.1 验证的致病相关miRNA | 第33-35页 |
| 3.3.2 pi-miR466和pi-miR1918的表达特性 | 第35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-37页 |
| 3.5 小结 | 第37-38页 |
| 4 amiR466表达载体的构建 | 第38-52页 |
| 4.1 实验材料及仪器 | 第38页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第38页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第38页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第38页 |
| 4.2 实验方法 | 第38-45页 |
| 4.2.1 拟南芥基因组DNA的提取 | 第39页 |
| 4.2.2 pre-miR159a的获得 | 第39-41页 |
| 4.2.3 pre-miR159a向amiR466的改造 | 第41-45页 |
| 4.2.4 amiR466表达载体的构建 | 第45页 |
| 4.3 结果与分析 | 第45-50页 |
| 4.3.1 提取的拟南芥基因组DNA | 第45-46页 |
| 4.3.2 克隆得到的拟南芥pre-miR159a | 第46-47页 |
| 4.3.3 构建的amiR466克隆载体 | 第47-48页 |
| 4.3.4 构建的amiR466表达载体 | 第48-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50页 |
| 4.5 小结 | 第50-52页 |
| 5 瞬时表达amiR466的功能研究 | 第52-60页 |
| 5.1 实验材料与仪器 | 第52页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第52页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第52页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第52页 |
| 5.2 实验方法 | 第52-55页 |
| 5.2.1 根癌农杆菌工程菌的获得 | 第52-53页 |
| 5.2.2 工程菌瞬时转化番茄叶片 | 第53-54页 |
| 5.2.3 基于番茄cDNA文库预测miR466的靶基因 | 第54页 |
| 5.2.4 靶基因的表达模式分析 | 第54-55页 |
| 5.3 结果与分析 | 第55-58页 |
| 5.3.1 根癌农杆菌工程菌 | 第55-56页 |
| 5.3.2 瞬时表达amiR466后番茄的表型变化 | 第56-57页 |
| 5.3.3 基于番茄cDNA文库的miR466的靶基因 | 第57-58页 |
| 5.4 讨论 | 第58-59页 |
| 5.5 小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录A 质粒图谱 | 第68-69页 |
| 附录B amiR466的前体基因序列 | 第69-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
