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致病疫霉中致病相关miRNA的挖掘及功能分析

摘要第4-5页
Abstract第5页
引言第9-10页
1 文献综述第10-22页
    1.1 晚疫病及其防治第10-12页
        1.1.1 晚疫病的致病菌第10-11页
        1.1.2 晚疫病的化学防治第11-12页
        1.1.3 晚疫病的生物防治第12页
    1.2 miRNA概述第12-15页
        1.2.1 miRNA的生成过程第12-13页
        1.2.2 miRNA的调控机制第13-14页
        1.2.3 miRNA的功能研究技术第14-15页
    1.3 病原物与番茄互作中miRNA的研究进展第15-20页
        1.3.1 病原物与番茄互作中miRNA的挖掘技术第15页
        1.3.2 病原物与番茄互作中的番茄miRNA第15-20页
        1.3.3 病原物与番茄互作中的病原物miRNA第20页
    1.4 amiRNA及其在番茄抗病中的应用第20-21页
    1.5 本研究的目的及意义第21-22页
2 致病疫霉中致病相关miRNA的预测及筛选第22-30页
    2.1 实验材料及仪器第22-23页
        2.1.1 实验数据第22页
        2.1.2 预测软件第22-23页
    2.2 实验方法第23-24页
        2.2.1 致病相关miRNA的预测第23-24页
        2.2.2 致病相关miRNA的靶基因预测第24页
        2.2.3 致病相关miRNA网络的构建第24页
    2.3 结果与分析第24-28页
        2.3.1 致病相关的miRNA第24-27页
        2.3.2 致病相关miRNA的靶基因第27-28页
        2.3.3 致病相关miRNA的关系网络图第28页
    2.4 讨论第28-29页
    2.5 小结第29-30页
3 致病疫霉中致病相关miRNA的鉴定及表达特性分析第30-38页
    3.1 实验材料及仪器第30-31页
        3.1.1 预测软件第30页
        3.1.2 实验材料第30页
        3.1.3 实验试剂第30-31页
        3.1.4 实验仪器第31页
    3.2 实验方法第31-33页
        3.2.1 候选pi-miRNA的二级结构验证第31页
        3.2.2 处理后致病疫霉的收集第31页
        3.2.3 总RNA的提取第31页
        3.2.4 miRNA的反转录第31-32页
        3.2.5 miRNA的验证及表达模式分析第32-33页
    3.3 结果与分析第33-35页
        3.3.1 验证的致病相关miRNA第33-35页
        3.3.2 pi-miR466和pi-miR1918的表达特性第35页
    3.4 讨论第35-37页
    3.5 小结第37-38页
4 amiR466表达载体的构建第38-52页
    4.1 实验材料及仪器第38页
        4.1.1 实验材料第38页
        4.1.2 实验试剂第38页
        4.1.3 实验仪器第38页
    4.2 实验方法第38-45页
        4.2.1 拟南芥基因组DNA的提取第39页
        4.2.2 pre-miR159a的获得第39-41页
        4.2.3 pre-miR159a向amiR466的改造第41-45页
        4.2.4 amiR466表达载体的构建第45页
    4.3 结果与分析第45-50页
        4.3.1 提取的拟南芥基因组DNA第45-46页
        4.3.2 克隆得到的拟南芥pre-miR159a第46-47页
        4.3.3 构建的amiR466克隆载体第47-48页
        4.3.4 构建的amiR466表达载体第48-50页
    4.4 讨论第50页
    4.5 小结第50-52页
5 瞬时表达amiR466的功能研究第52-60页
    5.1 实验材料与仪器第52页
        5.1.1 实验材料第52页
        5.1.2 实验试剂第52页
        5.1.3 实验仪器第52页
    5.2 实验方法第52-55页
        5.2.1 根癌农杆菌工程菌的获得第52-53页
        5.2.2 工程菌瞬时转化番茄叶片第53-54页
        5.2.3 基于番茄cDNA文库预测miR466的靶基因第54页
        5.2.4 靶基因的表达模式分析第54-55页
    5.3 结果与分析第55-58页
        5.3.1 根癌农杆菌工程菌第55-56页
        5.3.2 瞬时表达amiR466后番茄的表型变化第56-57页
        5.3.3 基于番茄cDNA文库的miR466的靶基因第57-58页
    5.4 讨论第58-59页
    5.5 小结第59-60页
结论第60-61页
参考文献第61-68页
附录A 质粒图谱第68-69页
附录B amiR466的前体基因序列第69-70页
攻读硕士学位期间发表学术论文情况第70-71页
致谢第71-72页

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