| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 菊粉 | 第11-13页 |
| 1.1.1 菊粉的结构特征 | 第11-12页 |
| 1.1.2 菊粉的来源 | 第12-13页 |
| 1.1.3 菊粉的性质 | 第13页 |
| 1.2 菊粉酶 | 第13-21页 |
| 1.2.1 菊粉酶的分类 | 第13-14页 |
| 1.2.2 菊粉酶的来源 | 第14页 |
| 1.2.3 菊粉酶的性质 | 第14-18页 |
| 1.2.4 菊粉酶的用途 | 第18-19页 |
| 1.2.5 菊粉酶的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3 固定化 | 第21-22页 |
| 1.3.1 固定化简介 | 第21页 |
| 1.3.2 固定化菊粉酶的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.4 本课题的研究目的与意义 | 第22页 |
| 1.5 本课题的主要内容 | 第22-23页 |
| 第2章 菊粉内切酶产生菌的筛选与鉴定 | 第23-32页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.2.1 土样来源 | 第23页 |
| 2.2.2 试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.3 主要设备和仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.4 主要培养基配方 | 第25-27页 |
| 2.2.5 溶液的配制 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.3.1 产菊粉酶菌株的筛选 | 第27-28页 |
| 2.3.2 菊粉内切酶活性测定 | 第28-29页 |
| 2.3.3 菌种鉴定 | 第29-30页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第30-31页 |
| 2.4.1 果糖标准曲线 | 第30页 |
| 2.4.2 菌种筛选 | 第30-31页 |
| 2.4.3 菌种鉴定 | 第31页 |
| 2.5 本章小结 | 第31-32页 |
| 第3章 基因的克隆表达 | 第32-60页 |
| 3.1 引言 | 第32-33页 |
| 3.2 实验材料 | 第33-37页 |
| 3.2.1 主要菌株和质粒 | 第33页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第33-34页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第34页 |
| 3.2.4 试剂和培养基的配制 | 第34-37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-46页 |
| 3.3.1 菊粉内切酶基因的克隆 | 第37-38页 |
| 3.3.2 DNA凝胶回收 | 第38-39页 |
| 3.3.3 目的基因与克隆载体的连接 | 第39-40页 |
| 3.3.4 重组质粒的抽提 | 第40页 |
| 3.3.5 菊粉内切酶重组表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 3.3.6 转化大肠杆菌并筛选重组子 | 第41页 |
| 3.3.7 质粒线性化 | 第41页 |
| 3.3.8 毕赤酵母GS115感受态的制备 | 第41-42页 |
| 3.3.9 毕赤酵母转化 | 第42页 |
| 3.3.10 遗传霉素抗性筛选 | 第42页 |
| 3.3.11 菌落PCR验证 | 第42-43页 |
| 3.3.12 毕赤酵母诱导表达 | 第43页 |
| 3.3.13 51发酵罐发酵 | 第43-44页 |
| 3.3.14 重组菊粉内切酶的纯化 | 第44页 |
| 3.3.15 考马斯亮蓝发测定蛋白质含量 | 第44页 |
| 3.3.16 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第44-45页 |
| 3.3.17 重组菊粉内切酶酶学性质研究 | 第45页 |
| 3.3.18 重组菊粉内切酶水解产物分析 | 第45-46页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第46-54页 |
| 3.4.1 菊粉内切酶基因的克隆 | 第46-47页 |
| 3.4.3 重组质粒INUCL1-9K的线性化 | 第47页 |
| 3.4.4 重组毕赤酵母阳性转化子的摇瓶发酵 | 第47-48页 |
| 3.4.5 51发酵罐发酵结果分析 | 第48-49页 |
| 3.4.6 蛋白标准曲线的绘制 | 第49页 |
| 3.4.7 重组菊粉内切酶的纯化 | 第49-50页 |
| 3.4.8 酶学性质研究 | 第50-54页 |
| 3.5 重组INUC1水解菊粉和洋姜粉产物分析 | 第54-57页 |
| 3.5.1 薄层层析分析 | 第54-55页 |
| 3.5.2 高效液相色谱分析 | 第55-57页 |
| 3.6 INUCL1序列与活性中心分析 | 第57-58页 |
| 3.7 INUCL1的系统进化树分析 | 第58-59页 |
| 3.8 本章小结 | 第59-60页 |
| 第4章 重组INUCL1的固定化研究 | 第60-67页 |
| 4.1 引言 | 第60页 |
| 4.2 实验材料 | 第60-61页 |
| 4.2.1 试剂 | 第60页 |
| 4.2.2 主要设备和仪器 | 第60-61页 |
| 4.3 实验内容与方法 | 第61-63页 |
| 4.3.1 壳聚糖载体固定化INUCL1 | 第61页 |
| 4.3.2 氨基载体HA固定化INUCL1 | 第61-62页 |
| 4.3.3 环氧基载体EP固定化INUCL1 | 第62页 |
| 4.3.4 大孔阴离子树脂D201固定化INUCL1 | 第62页 |
| 4.3.5 固定化效果的评价 | 第62-63页 |
| 4.4 实验结果 | 第63-66页 |
| 4.4.1 六种固定化方法固定化率和酶活回收率比较 | 第63页 |
| 4.4.2 壳聚糖固定化INUCL1的最适反应温度 | 第63页 |
| 4.4.3 壳聚糖固定化INUCL1的最适反应pH | 第63-64页 |
| 4.4.4 壳聚糖固定化INUCL1的热稳定性研究 | 第64-65页 |
| 4.4.5 壳聚糖固定化INUCL1的批次稳定性 | 第65页 |
| 4.4.6 壳聚糖固定化INUCL1水解洋姜粉产物分析 | 第65-66页 |
| 4.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 第5章 菊粉外切酶克隆表达及酶学性质研究 | 第67-78页 |
| 5.1 引言 | 第67页 |
| 5.2 实验材料 | 第67页 |
| 5.2.1 主要菌株和质粒 | 第67页 |
| 5.2.2 主要试剂与仪器 | 第67页 |
| 5.3 实验方法 | 第67-69页 |
| 5.3.1 菊粉外切酶基因的克隆 | 第67-68页 |
| 5.3.2 菊粉外切酶基因的异源表达 | 第68页 |
| 5.3.3 菊粉外切酶的纯化 | 第68页 |
| 5.3.4 菊粉外切酶酶学性质研究 | 第68-69页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第69-77页 |
| 5.4.1 菊粉外切酶基因inuZ6的克隆 | 第69页 |
| 5.4.2 菊粉外切酶INUZ6的异源表达 | 第69-70页 |
| 5.4.3 菊粉外切酶INUZ6的纯化 | 第70-71页 |
| 5.4.4 酶学性质研究 | 第71-77页 |
| 5.5 本章小结 | 第77-78页 |
| 第6章 结论与展望 | 第78-80页 |
| 6.1 结论 | 第78-79页 |
| 6.2 展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
