| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩写表 | 第8-16页 |
| 第1章 前言 | 第16-31页 |
| 1.1 能源危机 | 第16页 |
| 1.2 能源植物与木质素 | 第16-17页 |
| 1.3 木质素 | 第17-19页 |
| 1.3.1 木质素的基本结构 | 第17页 |
| 1.3.2 木质素的利与弊 | 第17-18页 |
| 1.3.3 木质素的生物合成途径 | 第18-19页 |
| 1.4 木质素生物合成的调控 | 第19-21页 |
| 1.4.1 木质素合成途径中关键酶基因的调控 | 第19-20页 |
| 1.4.2 转录因子对木质素合成的调控 | 第20-21页 |
| 1.5 转录因子 | 第21-26页 |
| 1.5.1 转录因子的结构特征及分类 | 第21-22页 |
| 1.5.2 MYB转录因子的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.5.3 MYB转录激活因子对木质素的合成调控 | 第23页 |
| 1.5.4 MYB转录抑制因子对木质素的合成调控 | 第23-26页 |
| 1.6 环境因子对木质素合成的影响 | 第26页 |
| 1.7 植物启动子的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.8 植物启动子的分类 | 第27-29页 |
| 1.8.1 组成型启动子 | 第28页 |
| 1.8.2 诱导型启动子 | 第28页 |
| 1.8.3 组织特异型启动子 | 第28-29页 |
| 1.9 象草的研究进展 | 第29-30页 |
| 1.10 研究的目的及意义 | 第30-31页 |
| 第2章 象草PpMYB4转录因子的克隆及其功能验证 | 第31-74页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-36页 |
| 2.1.1 实验植物 | 第31页 |
| 2.1.2 菌种和质粒 | 第31页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 2.1.4 主要试剂、试剂盒及来源 | 第32页 |
| 2.1.5 主要试剂配置 | 第32-36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-51页 |
| 2.2.1 PpMYB4基因CDS序列克隆 | 第36-40页 |
| 2.2.1.1 植物总RNA的提取 | 第36页 |
| 2.2.1.2 c DNA第一条链的合成 | 第36-37页 |
| 2.2.1.3 PpMYB4基因CDS序列的扩增 | 第37页 |
| 2.2.1.4 PCR产物检测与回收 | 第37-38页 |
| 2.2.1.5 目的基因与T载体的连接 | 第38页 |
| 2.2.1.6 大肠杆菌Top10感受态制备 | 第38-39页 |
| 2.2.1.7 重组质粒的转化 | 第39页 |
| 2.2.1.8 重组质粒的PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 2.2.1.9 质粒提取 | 第40页 |
| 2.2.2 PpMYB4基因生物信息学分析 | 第40-41页 |
| 2.2.2.1 序列基本信息分析 | 第40-41页 |
| 2.2.2.2 蛋白质基本理化性质分析 | 第41页 |
| 2.2.2.3 系统进化树构建及序列的多重比较 | 第41页 |
| 2.2.2.4 蛋白质结构模拟 | 第41页 |
| 2.2.3 象草PpMYB4亚细胞定位载体构建 | 第41-44页 |
| 2.2.3.1 目的片段的克隆 | 第41-42页 |
| 2.2.3.2 PCR产物回收 | 第42页 |
| 2.2.3.3 PCR产物的酶切与连接 | 第42-43页 |
| 2.2.3.4 重组子的鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.4 象草PpMYB4亚细胞定位研究 | 第44-45页 |
| 2.2.4.1 质粒浓缩 | 第44页 |
| 2.2.4.2 象草原生质体的分离 | 第44页 |
| 2.2.4.3 酶液的配制与酶解条件 | 第44页 |
| 2.2.4.4 原生质体的纯化 | 第44-45页 |
| 2.2.4.5 原生质体转化 | 第45页 |
| 2.2.5 象草PpMYB4过表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 2.2.5.1 目的片段的克隆 | 第45-46页 |
| 2.2.5.2 酶切、连接和转化 | 第46页 |
| 2.2.5.3 重组子的鉴定 | 第46页 |
| 2.2.6 烟草的遗传转化 | 第46-47页 |
| 2.2.6.1 EHA105感受态制备 | 第46页 |
| 2.2.6.2 农杆菌EHA105的冻融法转化 | 第46-47页 |
| 2.2.6.3 烟草叶盘法遗传转化 | 第47页 |
| 2.2.7 转基因烟草的鉴定 | 第47-48页 |
| 2.2.7.1 转基因烟草DNA提取 | 第47-48页 |
| 2.2.7.2 PCR鉴定 | 第48页 |
| 2.2.7.3 半定量RT-PCR鉴定 | 第48页 |
| 2.2.8 Real-time PCR检测 | 第48-50页 |
| 2.2.8.1 烟草总RNA的提取和检测 | 第48-49页 |
| 2.2.8.2 c DNA第一链合成 | 第49页 |
| 2.2.8.3 Real-time PCR | 第49-50页 |
| 2.2.9 木质素含量测定 | 第50-51页 |
| 2.2.9.1 木质素标准曲线的绘制 | 第50页 |
| 2.2.9.2 木质素含量测定 | 第50-51页 |
| 2.2.10 木质素特异性染色 | 第51页 |
| 2.2.10.1 Wiesner染色 | 第51页 |
| 2.2.10.2 M?ule染色 | 第51页 |
| 2.3 结果与分析 | 第51-68页 |
| 2.3.1 PpMYB4基因c DNA序列的克隆与分析 | 第51-53页 |
| 2.3.2 PpMYB4基因生物信息学分析 | 第53-60页 |
| 2.3.2.1 基本理化性质分析 | 第53-55页 |
| 2.3.2.2 PpMYB4氨基酸序列的系统进化树构建及序列的多重比较 | 第55-58页 |
| 2.3.2.3 蛋白质结构预测 | 第58-60页 |
| 2.3.3 PpMYB4基因的亚细胞载体构建 | 第60-61页 |
| 2.3.4 亚细胞定位 | 第61页 |
| 2.3.5 PpMYB4植物过表达载体构建 | 第61-62页 |
| 2.3.6 转基因烟草的PCR鉴定 | 第62-63页 |
| 2.3.7 转基因烟草的RT-PCR鉴定 | 第63页 |
| 2.3.8 转基因植株表型及木质素含量的测定 | 第63-65页 |
| 2.3.9 木质素特异染色 | 第65-67页 |
| 2.3.10 木质素合成关键酶基因的表达量测定 | 第67-68页 |
| 2.4 讨论 | 第68-72页 |
| 2.4.1 PpMYB4基因的基本特征 | 第68页 |
| 2.4.2 PpMYB4转录因子蛋白结构与系统进化分析 | 第68-69页 |
| 2.4.3 PpMYB4基因亚细胞定位 | 第69-70页 |
| 2.4.4 PpMYB4在烟草中过量表达 | 第70-72页 |
| 2.5 本章总结 | 第72-74页 |
| 第3章 象草PpCCR基因启动子的克隆及表达分析 | 第74-96页 |
| 3.1 引言 | 第74-75页 |
| 3.2 实验材料 | 第75-77页 |
| 3.2.1 实验植物 | 第75页 |
| 3.2.2 菌种和质粒 | 第75页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第75页 |
| 3.2.4 主要试剂、试剂盒及来源 | 第75-76页 |
| 3.2.5 主要试剂配置 | 第76-77页 |
| 3.2.5.1 GUS染色所需溶液 | 第76页 |
| 3.2.5.2 GUS酶活检测所需溶液 | 第76页 |
| 3.2.5.3 转基因烟草激素响应实验所需溶液 | 第76-77页 |
| 3.2.5.4 其他溶液及培养基 | 第77页 |
| 3.3 实验方法 | 第77-83页 |
| 3.3.1 象草PpCCR基因启动子的克隆 | 第77-79页 |
| 3.3.1.1 植物基因组DNA的提取 | 第77页 |
| 3.3.1.2 引物的设计 | 第77-78页 |
| 3.3.1.3 PCR扩增 | 第78-79页 |
| 3.3.1.4 PCR产物的检测、回收与测序 | 第79页 |
| 3.3.1.5 序列分析 | 第79页 |
| 3.3.2 象草PpCCR基因启动子表达载体的构建 | 第79-80页 |
| 3.3.2.1 目的片段的克隆 | 第79-80页 |
| 3.3.2.2 酶切、连接与转化 | 第80页 |
| 3.3.2.3 重组子的鉴定 | 第80页 |
| 3.3.3 烟草的遗传转化 | 第80页 |
| 3.3.3.1 农杆菌EHA105感受态的制备 | 第80页 |
| 3.3.3.2 农杆菌EHA105的冻融法转化 | 第80页 |
| 3.3.3.3 烟草的叶盘法转化 | 第80页 |
| 3.3.4 转基因烟草的鉴定 | 第80-81页 |
| 3.3.4.1 转基因植株DNA的提取和PCR鉴定 | 第80页 |
| 3.3.4.2 GUS组织化学染色 | 第80-81页 |
| 3.3.5 植物激素处理 | 第81页 |
| 3.3.6 GUS酶活性测定 | 第81-82页 |
| 3.3.6.1 植物总蛋白的提取 | 第81页 |
| 3.3.6.2 蛋白定量 | 第81页 |
| 3.3.6.3 提取液GUS活性的荧光测定 | 第81-82页 |
| 3.3.7 Real-time PCR检测 | 第82-83页 |
| 3.3.7.1 烟草总RNA的提取和检测 | 第82页 |
| 3.3.7.2 c DNA第一链合成 | 第82页 |
| 3.3.7.3 Real-time PCR | 第82-83页 |
| 3.4 结果与分析 | 第83-93页 |
| 3.4.1 PpCCR基因启动子的克隆 | 第83-85页 |
| 3.4.2 PpCCR基启动子序列分析 | 第85-87页 |
| 3.4.3 PpCCR启动子载体构建 | 第87-88页 |
| 3.4.4 烟草遗传转化与鉴定 | 第88-89页 |
| 3.4.5 GUS组织化学染色 | 第89-90页 |
| 3.4.6 PpCCR启动子对不同激素的响应 | 第90-93页 |
| 3.4.6.1 激素处理不同时间对转基因植株茎部GUS酶活的影响 | 第90-92页 |
| 3.4.6.2 激素处理不同时间转基因植株茎部GUS表达量 | 第92-93页 |
| 3.5 讨论 | 第93-95页 |
| 3.5.1 PpCCR基因启动子的顺式作用元件 | 第93-94页 |
| 3.5.2 PpCCR启动子的表达特异性 | 第94-95页 |
| 3.6 本章小结 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-111页 |
| 附录A 引物表 | 第111-113页 |
| 附录B 标准曲线 | 第113-114页 |
| 附录C 硕士在读期间所发论文 | 第114页 |
