| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略词 | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-45页 |
| 1.1 蛋白质稳态及其维持 | 第9-11页 |
| 1.2 泛素-蛋白酶体途径 | 第11-15页 |
| 1.2.1 泛素及泛素化修饰 | 第11-13页 |
| 1.2.2 蛋白酶体 | 第13-15页 |
| 1.3 泛素连接酶 | 第15-17页 |
| 1.3.1 HECT型泛素连接酶 | 第16页 |
| 1.3.2 RING-finger型泛素连接酶 | 第16页 |
| 1.3.3 RBR型泛素连接酶 | 第16-17页 |
| 1.4 CRL型泛素连接酶 | 第17-36页 |
| 1.4.1 Cul1与SCF泛素连接酶 | 第19-27页 |
| 1.4.2 Cul2/Cul5和泛素连接酶ECS | 第27-30页 |
| 1.4.3 CRL3泛素连接酶 | 第30-32页 |
| 1.4.4 CRL4泛素连接酶 | 第32-35页 |
| 1.4.5 CRL7泛素连接酶 | 第35-36页 |
| 1.5 CRL组装与活性的动态调节 | 第36-44页 |
| 1.5.1 Nedd8分子和Nedd8修饰(neddylation) | 第37-39页 |
| 1.5.2 COP9信号体和Cullin蛋白的去Nedd8修饰 | 第39-42页 |
| 1.5.3 CSN悖论(CSN paradox) | 第42-44页 |
| 1.6 本课题的研究内容及意义 | 第44-45页 |
| 第二章 材料与方法 | 第45-63页 |
| 2.1 培养基 | 第45-48页 |
| 2.1.1 LB培养基 | 第45页 |
| 2.1.2 Trace element储液 | 第45页 |
| 2.1.3 50× Vogel's salt | 第45-46页 |
| 2.1.4 0.5 M QA | 第46页 |
| 2.1.5 Minimal media | 第46页 |
| 2.1.6 Minmal slants | 第46-47页 |
| 2.1.7 Race tube培养基(300 mL) | 第47页 |
| 2.1.8 10×Fig's | 第47页 |
| 2.1.9 Bottom agar/Top agar | 第47页 |
| 2.1.10 2×Westergaard's salt(1 L) | 第47-48页 |
| 2.1.11 crossing plate+ His(1 L) | 第48页 |
| 2.2 菌株 | 第48页 |
| 2.3 实验方法 | 第48-63页 |
| 2.3.1 基因组DNA的提取 | 第48-49页 |
| 2.3.2 载体构建 | 第49-52页 |
| 2.3.3 电穿孔转化 | 第52-53页 |
| 2.3.4 杂交 | 第53页 |
| 2.3.5 孢子萌发 | 第53页 |
| 2.3.6 粗糙脉孢菌基因敲除(Knock out)菌株的构建 | 第53-54页 |
| 2.3.7 表型分析 | 第54-55页 |
| 2.3.8 可溶性蛋白质提取 | 第55页 |
| 2.3.9 蛋白质免疫印迹(Western blot) | 第55-57页 |
| 2.3.10 蛋白质降解 | 第57页 |
| 2.3.11 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation) | 第57-58页 |
| 2.3.12 原核蛋白表达及纯化 | 第58-61页 |
| 2.3.13 多克隆抗体制备 | 第61-63页 |
| 第三章 Cul1~(Nedd8)/Cul1可作为粗糙脉孢菌生理和发育的指标 | 第63-70页 |
| 3.1 cul1~(K722R)点突变菌株与csn突变体表型相似 | 第63-66页 |
| 3.2 Cul1~(Nedd8)/Cul1可以反映粗糙脉孢菌的生长和发育情况 | 第66-68页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第68-70页 |
| 第四章 通过诱导表达Cul1~(K722R)蛋白降低Cul1~(Nedd8)/Cul1比率能够救回csn突变体的表型缺陷 | 第70-86页 |
| 4.1 诱导表达Cul1~(K722R)蛋白能够救回csn突变体的表型缺陷 | 第70-76页 |
| 4.2 诱导表达Cul1~(K722R)蛋白能够降低csn突变体中的Cul1~(Nedd8)/Cul1比值 | 第76-80页 |
| 4.3 诱导表达Cul1~(K722R)能够救回csn-3~(KO)和339-59菌株的表型缺陷 | 第80-84页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第84-86页 |
| 第五章 Cul1~(K722R)通过与底物识别模块形成复合体而稳定F-box蛋白 | 第86-96页 |
| 5.1 没有Nedd8修饰的Cul1具有稳定F-box蛋白的作用 | 第86-90页 |
| 5.2 Cul1~(K722R)通过与Skp-1-F-box模块相互作用来稳定F-box蛋白 | 第90-95页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第95-96页 |
| 第六章 结论与展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 附录 | 第113-118页 |
| 简历 | 第118页 |
