| 致谢 | 第4-8页 |
| 表录 | 第8-9页 |
| List of Tables | 第9-10页 |
| 图录 | 第10-12页 |
| List of Figures | 第12-14页 |
| 摘要 | 第14-16页 |
| Abstract | 第16页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-44页 |
| 1 双生病毒致病机理研究进展 | 第19-34页 |
| 1.1 引言 | 第19页 |
| 1.2 双生病毒科的分类、寄主范围及介体传播 | 第19-20页 |
| 1.3 双生病毒的基因组结构与功能 | 第20-22页 |
| 1.4 双生病毒的危害及其经济重要性 | 第22页 |
| 1.5 双生病毒的侵染过程 | 第22-29页 |
| 1.6 双生病毒的致病因子 | 第29-30页 |
| 1.7 卫星DNAβ分子的发现及其在致病中的作用 | 第30-31页 |
| 1.8 Begomovirus／DNAβ:一种新型的病害复合体 | 第31页 |
| 1.9 重组是病毒变异和新的病害产生的重要因素 | 第31-32页 |
| 1.10 展望 | 第32-34页 |
| 2 病毒诱导的基因沉默及其在功能基因组研究中的应用 | 第34-44页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 VIGS的建立与发展 | 第34-37页 |
| 2.3 VIGS的机制 | 第37-40页 |
| 2.4 利用VIGS进行植物基因组的功能研究 | 第40-44页 |
| 第二章 中国番茄黄化曲叶病毒及伴随的DNAβ的基因组结构 | 第44-55页 |
| 1 材料与方法 | 第44-48页 |
| 1.1 毒源 | 第44页 |
| 1.2 抗原表位谱的TAS-ELISA测定 | 第44-45页 |
| 1.3 植物总DNA的抽提 | 第45页 |
| 1.4 DNA-A全长基因组的克隆和序列测定 | 第45-46页 |
| 1.5 DNA-B组分的寻找方法 | 第46页 |
| 1.6 DNAβ全长基因组的克隆和序列测定 | 第46-47页 |
| 1.7 序列分析 | 第47页 |
| 1.8 田间样品的PCR检测 | 第47-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-53页 |
| 2.1 Y10分离物的抗原表位谱测定 | 第48页 |
| 2.2 Y10分离物DNA-A的全长基因组的克隆及序列分析 | 第48-51页 |
| 2.3 TYLCCNV-Y10 DNA-B组分的检测 | 第51页 |
| 2.4 卫星DNAβ分子的发现、克隆和序列分析 | 第51页 |
| 2.5 TYLCCNV田间样品的DNAβ检测 | 第51-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 第三章 TYLCCNV DNA-A及伴随的DNAβ在致病中的作用 | 第55-71页 |
| 1 材料与方法 | 第55-60页 |
| 1.1 TYLCCNV-Y10 DNA-A与DNAβ的侵染性克隆构建 | 第55-59页 |
| 1.2 农杆菌介导的植株接种 | 第59页 |
| 1.3 病毒DNA的Southern印迹检测 | 第59页 |
| 1.4 TAS-ELISA测定 | 第59-60页 |
| 1.5 叶盘法检测病毒基因组的复制 | 第60页 |
| 1.6 免疫捕获PCR | 第60页 |
| 1.7 粉虱传毒试验 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-68页 |
| 2.1 TYLCCNV-Y10 DNA-A和DNAβ全长侵染性克隆的构建 | 第60-62页 |
| 2.2 TYLCCNV-Y10 DNA-A和DNAβ的致病性测定 | 第62-63页 |
| 2.3 TYLCCNV-Y10寄主范围的测定 | 第63-64页 |
| 2.4 DNAβ对DNA-A的作用 | 第64-66页 |
| 2.5 DNA-A对DNAβ的作用 | 第66-68页 |
| 3 讨论 | 第68-71页 |
| 第四章 TYLCCNV DNAβ各功能区域的鉴定与分析 | 第71-84页 |
| 1 材料与方法 | 第71-75页 |
| 1.1 βC1突变体的构建 | 第71-72页 |
| 1.2 A-Rich区缺失突变体的构建 | 第72-73页 |
| 1.3 复制重组子的构建 | 第73-74页 |
| 1.4 三亲交配及农杆菌接种 | 第74页 |
| 1.5 免疫捕获PCR | 第74页 |
| 1.6 Southern印迹杂交 | 第74-75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-81页 |
| 2.1 TYLCCNV-Y10 DNAββC1基因的功能鉴定 | 第75-77页 |
| 2.2 TYLCCNV DNAβ A-Rich区的功能鉴定 | 第77-80页 |
| 2.3 TYLCCNV DNAβ复制区域的鉴定 | 第80-81页 |
| 3 讨论 | 第81-84页 |
| 第五章 TYLCCNV DNA-A与DNAβ之间重组的发现及致病性测定 | 第84-97页 |
| 1 材料与方法 | 第84-86页 |
| 1.1 RecDNA-Aβ分子的检测与克隆 | 第84-85页 |
| 1.2 RecDNA-Aβ分子序列分析 | 第85页 |
| 1.3 侵染性克隆构建 | 第85-86页 |
| 1.4 农杆菌接种和致病性测定 | 第86页 |
| 1.5 Southern印迹杂交 | 第86页 |
| 1.6 免疫捕获PCR | 第86页 |
| 1.7 TYLCCNV分离物中RecDNA-Aβ的检测 | 第86页 |
| 2 结果与分析 | 第86-94页 |
| 2.1 TYLCCNV-Y10中RecDNA-Aβ分子的发现与克隆 | 第86-87页 |
| 2.2 RecDNA-Aβ分子的序列分析 | 第87-89页 |
| 2.3 RecDNA-Aβ分子侵染性克隆的构建及致病性测定 | 第89-90页 |
| 2.4 RecDNA-Aβ在植株组织中的积累 | 第90页 |
| 2.5 RecDNA-Aβ的包壳检测 | 第90页 |
| 2.6 TYLCCNV田间分离物的RecDNA-Aβ检测 | 第90-94页 |
| 3 讨论 | 第94-97页 |
| 第六章 卫星DNAmβ沉默载体研究植物功能基因组的体系构建 | 第97-120页 |
| 1 材料与方法 | 第97-101页 |
| 1.1 转GFP基因本氏烟 | 第97页 |
| 1.2 载体构建 | 第97-100页 |
| 1.3 农杆菌接种 | 第100-101页 |
| 1.4 半定量RT-PCR | 第101页 |
| 1.5 Southern印迹检测 | 第101页 |
| 1.6 GFP荧光检测与成像 | 第101页 |
| 2 结果与分析 | 第101-116页 |
| 2.1 DNAmβ基因沉默载体的构建 | 第101-102页 |
| 2.2 在本氏烟中DNAmβ载体高效抑制转基因GFP和内源基因的表达 | 第102-105页 |
| 2.3 DNAmβ载体诱导分生组织特异性表达的PCNA基因发生沉默 | 第105页 |
| 2.4 DNAmβ载体同时沉默两个基因 | 第105页 |
| 2.5 DNAmβ载体插入片段长度与基因沉默的效率 | 第105-106页 |
| 2.6 沉默植株目标基因的mRNA水平显著降低 | 第106-108页 |
| 2.7 沉默植株中病毒卫星DNA积累水平降低 | 第108-109页 |
| 2.8 DNAmβ载体诱导基因沉默的起始机制 | 第109页 |
| 2.9 DNAmβ克隆载体的优化 | 第109页 |
| 2.10 DNAmβ载体在多种寄主植物上建立VIGS体系 | 第109-114页 |
| 2.11 TYLCCNV DNAmβ载体与多种异源病毒诱导的基因沉默 | 第114-116页 |
| 3 讨论 | 第116-120页 |
| 全文小结 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-137页 |
| 附录A: 本论文所用缩写词及中英文对照 | 第137-139页 |
| 附录B: 本论文所用病毒缩写及中英文对照 | 第139-141页 |
| 附录C: 本论文生物中文名和拉丁名对照 | 第141-142页 |
| 附录D: 常用试剂的配制 | 第142-147页 |
| 附录E: 常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第147-148页 |
| 研究生期间发表的学术论文 | 第148-149页 |
