| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 缩略词 | 第16-19页 |
| 前言 | 第19-28页 |
| 参考文献 | 第23-28页 |
| 第一章 重组耻垢分枝杆菌rMS-Ag85a-IL-17a/f构建及体内诱导自身抗体产生 | 第28-71页 |
| 实验一 重组耻垢分枝杆菌rMS-Ag85a-IL-17a构建及体内诱导自身抗体产生 | 第30-58页 |
| 1 材料 | 第30-32页 |
| 1.1 菌株、质粒、培养基 | 第30-31页 |
| 1.2 酶、抗体、化学试剂、抗生素及试剂盒 | 第31页 |
| 1.3 荧光定量PCR检测用引物 | 第31-32页 |
| 1.4 实验动物 | 第32页 |
| 1.5 主要实验仪器 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-48页 |
| 2.1 重组大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒p MFA42S-Ag85a-IL-17a构建及鉴定 | 第32-39页 |
| 2.2 表达Ag85A-IL-17A的重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建及鉴定 | 第39-42页 |
| 2.3 重组耻垢分枝杆菌rMS-Ag85a-IL-17a小鼠体内诱导抗IL-17A自身抗体 | 第42-48页 |
| 2.4 统计学分析 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-58页 |
| 3.1 重组质粒p MFA42S-Ag85a-IL-17a的构建及鉴定 | 第48-50页 |
| 3.2 重组耻垢分枝杆菌rMS-Ag85a-IL-17a的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3 重组耻垢分枝杆菌与野生型耻垢分枝杆菌生长曲线的比较 | 第51-52页 |
| 3.4 Western blot鉴定Ag85A-IL-17A在重组耻垢分枝杆菌中的表达 | 第52页 |
| 3.5 rMS-Ag85a-IL-17a鼻腔黏膜接种后对小鼠体重的影响 | 第52-53页 |
| 3.6 rMS-Ag85a-IL-17a小鼠体内诱导产生抗IL-17A自身抗体 | 第53-54页 |
| 3.7 小鼠肺组织匀浆中耻垢分枝杆菌CFU的变化 | 第54-55页 |
| 3.8 rMS-Ag85a-IL-17a对小鼠肺组织匀浆中IL-5，IL-12，IL-17A表达水平的影响 | 第55页 |
| 3.9 rMS-Ag85a-IL-17a对小鼠肺组织T-bet，GATA3 m RNA表达的影响 | 第55-56页 |
| 3.10 rMS-Ag85a-IL-17a鼻腔黏膜接种后小鼠肺组织病理的改变 | 第56-58页 |
| 实验二 重组耻垢分枝杆菌rMS-Ag85a-IL-17f的构建及相关功能研究 | 第58-66页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| 1.1 菌株、质粒、培养基 | 第58-59页 |
| 1.2 实验动物 | 第59页 |
| 1.3 化学试剂及试剂盒 | 第59页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第59页 |
| 2 方法 | 第59-60页 |
| 2.1 实验动物分组 | 第59-60页 |
| 2.2 肺泡灌洗液（BALF）的收集 | 第60页 |
| 2.3 BALF中肺炎链球菌培养及计数 | 第60页 |
| 2.4 统计学分析 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-62页 |
| 3.1 小鼠BALF菌落计数 | 第60-61页 |
| 3.2 rIL-17F对小鼠BALF细胞分类计数的影响 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 第二章 重组耻垢分枝杆菌rMS-Ag85a-IL-17a对小鼠巨噬细胞RAW264.7 功能的影响 | 第71-89页 |
| 1 材料 | 第71-73页 |
| 1.1 细胞系、菌株及培养基 | 第71-72页 |
| 1.2 试剂盒及主要化学试剂 | 第72页 |
| 1.3 荧光定量PCR检测用引物 | 第72-73页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第73页 |
| 2 方法 | 第73-78页 |
| 2.1 MS及rMS-Ag85a-IL-17a菌株准备及RAW264.7 细胞培养 | 第73-74页 |
| 2.2 MS及rMS-Ag85a-IL-17a感染RAW264.7 细胞 | 第74-75页 |
| 2.3 细胞培养上清NO浓度测定（Griess法） | 第75-76页 |
| 2.4 ELISA法测定细胞培养上清中细胞因子IL-6，IL-10，TNF-α及MIP-1α浓度 | 第76-77页 |
| 2.5 实时荧光定量PCR法检测细胞中IL-6，IL-10，Defb-2 及i NOS的表达 | 第77-78页 |
| 2.6 统计学分析 | 第78页 |
| 3 结果 | 第78-83页 |
| 3.1 巨噬细胞内CFU的比较 | 第78-79页 |
| 3.2 rMS-Ag85a-IL-17a对巨噬细胞凋亡率的影响 | 第79-80页 |
| 3.3 rMS-Ag85a-IL-17a对巨噬细胞分泌NO的影响 | 第80-81页 |
| 3.4 rMS-Ag85a-IL-17a对巨噬细胞培养上清中IL-6，IL-10，MIP-1α 及TNF-α 表达的影响 | 第81-82页 |
| 3.5 rMS-Ag85a-IL-17a对巨噬细胞IL-6，IL-10，Defb-2 及i NOS m RNA表达的影响 | 第82-83页 |
| 4 讨论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-89页 |
| 第三章 重组耻垢分枝杆菌rMS-Ag85a-IL-17a抗过敏性气道炎症机制研究 | 第89-123页 |
| 1 材料 | 第89-92页 |
| 1.1 实验动物 | 第89-90页 |
| 1.2 菌株及培养基 | 第90页 |
| 1.3 试剂盒、抗生素及主要化学试剂 | 第90-91页 |
| 1.4 荧光定量PCR检测用引物 | 第91页 |
| 1.5 主要实验仪器 | 第91-92页 |
| 2 方法 | 第92-101页 |
| 2.1 菌株及实验动物准备 | 第92页 |
| 2.2 动物免疫方案 | 第92-94页 |
| 2.3 标本采集及处理 | 第94-97页 |
| 2.4 实验指标测定 | 第97-99页 |
| 2.5 肺组织病理学分析 | 第99-101页 |
| 2.6 统计学分析 | 第101页 |
| 3 结果 | 第101-117页 |
| 3.1 小鼠血清中抗IL-17A自身抗体的滴度变化 | 第101-102页 |
| 3.2 rMS-Ag85a-IL-17a对哮喘小鼠BALF中炎性细胞的影响 | 第102-104页 |
| 3.3 rMS-Ag85a-IL-17a对哮喘小鼠BALF中细胞因子IL-5，IL-6，IL-10，IL-12，IL-13 及IL-17A表达的影响 | 第104-106页 |
| 3.4 rMS-Ag85a-IL-17a对哮喘小鼠脾细胞培养上清中细胞因子表达的影响 | 第106-108页 |
| 3.5 rMS-Ag85a-IL-17a对小鼠BALF中髓过氧化物酶活力的影响 | 第108-109页 |
| 3.6 rMS-Ag85a-IL-17a对小鼠肺组织IL-6，IL-10，IL-23，Eotaxin-1，MIP-2，TGF-β，T-bet，GATA3和RORγt m RNA表达的影响 | 第109-110页 |
| 3.7 rMS-Ag85a-IL-17a对小鼠脾细胞增殖的影响 | 第110-111页 |
| 3.8 rMS-Ag85a-IL-17a对哮喘小鼠脾脏Th1和Th2细胞数量的影响 | 第111-114页 |
| 3.9 rMS-Ag85a-IL-17a黏膜免疫后小鼠肺组织病理改变 | 第114-117页 |
| 4 讨论 | 第117-120页 |
| 参考文献 | 第120-123页 |
| 第四章 全文总结 | 第123-125页 |
| 1 研究内容总结 | 第123页 |
| 2 研究的创新点 | 第123-124页 |
| 3 研究的意义及展望 | 第124-125页 |
| 附录：实验室常规培养基及主要试剂配方 | 第125-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 攻读博士期间发表学术论文及参加科学研究项目情况 | 第129页 |
