| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 1 引言 | 第10-17页 |
| 1.1 猪流行性腹泻研究进展 | 第10页 |
| 1.2 猪流行性腹泻病毒的分子生物学 | 第10-13页 |
| 1.2.1 猪流行性腹泻病毒病原学进展 | 第10-11页 |
| 1.2.2 猪流行性腹泻病毒理化特性及培养特性 | 第11页 |
| 1.2.3 猪流行性腹泻病毒基因组的结构特征 | 第11-12页 |
| 1.2.4 猪流行性腹泻病毒蛋白及作用 | 第12-13页 |
| 1.3 噬菌体展示技术研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3.1 噬菌体展示技术的筛选方法 | 第13-14页 |
| 1.3.2 噬菌体展示技术的应用 | 第14-15页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 病毒株、细胞株、菌株及载体 | 第17页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第17页 |
| 2.1.3 试剂盒、工具酶及抗体试剂 | 第17页 |
| 2.1.4 主要药品及试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.5 仪器及设备 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-31页 |
| 2.2.1 PEDV M基因的扩增 | 第19-20页 |
| 2.2.2 原核表达载体的构建 | 第20-21页 |
| 2.2.3 重组质粒的鉴定 | 第21-23页 |
| 2.2.4 重组质粒pET32a-PEDV-M在大肠杆菌表达系统中的诱导表达 | 第23-24页 |
| 2.2.5 重组蛋白的纯化及复性 | 第24页 |
| 2.2.6 猪流行性腹泻M多克隆抗体的制备与鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.7 噬菌体随机十二肽库对PEDV M蛋白生物淘选 | 第25-26页 |
| 2.2.8 噬菌体克隆的特征鉴定 | 第26-28页 |
| 2.2.9 所选多肽配体共有氨基酸序列的推导及合成 | 第28页 |
| 2.2.10 噬菌体-ELISA 对 PEDV 鉴别诊断及敏感性试验 | 第28页 |
| 2.2.11 多肽的生物活性检测 | 第28-31页 |
| 2.3 统计分析 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-43页 |
| 3.1 猪流行性腹泻病毒原核表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.1.1 猪流行性腹泻病毒M基因的克隆 | 第32页 |
| 3.1.2 重组质粒pET-32a-PEDV-M的构建及鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2 M蛋白的表达与活性鉴定 | 第33-35页 |
| 3.2.1 M蛋白的表达与纯化 | 第33-34页 |
| 3.2.2 M重组蛋白的Western Blot分析 | 第34-35页 |
| 3.2.3 纯化回收后M蛋白的复性及浓度测定 | 第35页 |
| 3.3 PEDV M多克隆抗体的生物活性鉴定 | 第35-37页 |
| 3.3.1 PEDV M多克隆抗体效价的检测 | 第35-36页 |
| 3.3.2 PEDV M多抗血清的间接免疫荧光检测 | 第36页 |
| 3.3.3 PEDV M多抗血清的Western Blot检测 | 第36-37页 |
| 3.4 噬菌体十二肽库对M靶蛋白的生物淘选 | 第37-43页 |
| 3.4.1 噬菌体十二肽库对M靶蛋白的淘选 | 第37-39页 |
| 3.4.2 亲和噬菌体克隆序列测定 | 第39页 |
| 3.4.3 噬菌体-ELISA对PEDV敏感性试验及鉴别诊断 | 第39-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 4.1 猪流行性腹泻病毒M基因的克隆及原核表达 | 第43页 |
| 4.2 多克隆抗体血清的制备与鉴定 | 第43-44页 |
| 4.3 M亲和肽的筛选 | 第44页 |
| 4.4 M亲和肽的功能鉴定 | 第44-45页 |
| 4.5 噬菌体展示技术的未来发展 | 第45-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第53页 |
