| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-24页 |
| 1.1 玉米纹枯病 | 第12-14页 |
| 1.1.1 症状 | 第12-13页 |
| 1.1.2 病原 | 第13页 |
| 1.1.3 发病循环规律 | 第13-14页 |
| 1.2 植物病原真菌的致病机制 | 第14-15页 |
| 1.2.1 病原物的寄生能力 | 第14页 |
| 1.2.2 机械压力 | 第14页 |
| 1.2.3 毒素 | 第14页 |
| 1.2.4 酶 | 第14-15页 |
| 1.2.5 生长调节物质 | 第15页 |
| 1.3 植物的抗病机制、防卫反应与抗病种质资源的筛选 | 第15-16页 |
| 1.3.1 植物的抗病机制 | 第15-16页 |
| 1.3.2 植物的防卫反应 | 第16页 |
| 1.3.3 植物的抗病种质资源的筛选 | 第16页 |
| 1.4 植物的免疫系统 | 第16-19页 |
| 1.4.1 PTI | 第17页 |
| 1.4.2 ETI | 第17-18页 |
| 1.4.3 PTI与ETI的联系 | 第18页 |
| 1.4.4 植物的系统诱导抗病性 | 第18-19页 |
| 1.4.4.1 系统获得抗病性（SAR） | 第18-19页 |
| 1.4.4.2 诱导系统抗病性（ISR） | 第19页 |
| 1.5 纤维素酶的近期研究进展 | 第19-23页 |
| 1.5.1 纤维素酶的构成 | 第19-20页 |
| 1.5.1.1 内切葡聚糖酶 | 第19-20页 |
| 1.5.1.2 外切葡聚糖酶 | 第20页 |
| 1.5.1.3 β-葡聚糖苷酶 | 第20页 |
| 1.5.2 纤维素酶的克隆表达 | 第20-23页 |
| 1.6 立题依据 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 植物 | 第24页 |
| 2.1.3 酶、试剂盒、生化试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 仪器 | 第25页 |
| 2.1.5 溶液及培养基配制配方 | 第25-27页 |
| 2.1.5.1 溶液配制配方 | 第25-26页 |
| 2.1.5.2 培养基配制配方 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-44页 |
| 2.2.1 EG1 肽段突变在毕赤酵母（Pichia pastoris）中的表达 | 第27-35页 |
| 2.2.1.1 EG1肽段突变酵母工程菌的获得 | 第27-33页 |
| 2.2.1.2 EG1野生型WT-C和突变型D32A-C的诱导表达、纯化和检测 | 第33-35页 |
| 2.2.2 EG1野生型WT-C和突变型D32A-C PAMP分子活性的分析 | 第35-41页 |
| 2.2.2.1 WT-C、D32A-C的接种实验 | 第36页 |
| 2.2.2.2 WT、D32A、WT-C6和D32A-C6对玉米防卫反应基因的影响 | 第36-38页 |
| 2.2.2.3 利用 PVX 表达系统对 wt-c6 和 d32a-c6 进行表达 | 第38-41页 |
| 2.2.3 EG1定点突变基因的真核表达 | 第41-43页 |
| 2.2.3.1 定点突变基因的获得 | 第41-43页 |
| 2.2.4 EG1活力缺失突变型基因（d32a-ra）在毕赤酵母中的表达 | 第43页 |
| 2.2.5 D32A、D32A-RA的接种实验 | 第43页 |
| 2.2.5.1 D32A和D32A-RA接种玉米叶片活性氧类物质检测 | 第43页 |
| 2.2.6 利用PVX表达系统对d32a和d32a-ra进行表达 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-61页 |
| 3.1 EG1肽段突变在毕赤酵母中的表达 | 第44-50页 |
| 3.1.1 EG1肽段突变酵母工程菌的获得 | 第44-45页 |
| 3.1.2 pPIC9K/d32a-c电击法转化 P.pastoris GS115与酵母转化子的筛选与鉴定 | 第45-48页 |
| 3.1.3 EG1肽段突变工程菌的诱导表达、纯化和检测 | 第48页 |
| 3.1.3.1 WT-C和D32A-C的诱导表达和纯化 | 第48页 |
| 3.1.4 纯化产物的SDS-PAGE分析 | 第48-50页 |
| 3.2 WT-C6与D32A-C6的PAMP活性的分析 | 第50-52页 |
| 3.2.1 纯化产物的催化活性检测 | 第50页 |
| 3.2.2 WT、WT-C6和D32A、D32A-C6对防卫反应基因的影响 | 第50-51页 |
| 3.2.3 利用PVX表达系统对wt-c6和d32a-c6进行表达 | 第51-52页 |
| 3.3 EG1定点突变基因的真核表达 | 第52-54页 |
| 3.3.1 EG1定点突变基因的获得 | 第52页 |
| 3.3.2 EG1活力缺失突变型基因在毕赤酵母（Pichia pastoris）中的表达 | 第52-54页 |
| 3.3.2.1 EG1活力缺失突变型工程菌的获得 | 第52-53页 |
| 3.3.2.2 8 个定点突变基因电击法转化GS115与酵母转化子的筛选与鉴定 | 第53-54页 |
| 3.4 EG1定点突变基因d32a-ra的PAMP活性分析 | 第54-57页 |
| 3.4.1 纯化产物RA的催化活性检测 | 第54-55页 |
| 3.4.2 RA接种试验 | 第55页 |
| 3.4.3 RA接种玉米和烟草对其产生活性氧的影响 | 第55-56页 |
| 3.4.4 RA对防卫反应基因的影响 | 第56-57页 |
| 3.5 利用PVX表达系统对d32a-ra进行表达 | 第57-61页 |
| 3.5.1 PVX表达载体的构建 | 第58-60页 |
| 3.5.2 农杆菌接种烟草叶片 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 4.1 β-1,4-内切纤维素酶EG1在毕赤酵母中的表达 | 第61页 |
| 4.1.1 酵母表达载体的构建 | 第61页 |
| 4.1.2 β-1,4-内切纤维素酶的纯化 | 第61页 |
| 4.2 β-1,4-内切纤维素酶PAMP分子活性的验证 | 第61-62页 |
| 4.3 PVX表达载体的应用 | 第62-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 5.1 EG1的PAMP活性区段存在于保守区段C6内 | 第63页 |
| 5.2 EG1发挥PAMP活性的位点为R | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
