| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 转录因子的概述 | 第12-16页 |
| 1.1.1 转录因子功能域 | 第12-13页 |
| 1.1.2 与DNA结合的转录因子家族 | 第13-16页 |
| 1.2 芸薹生链格孢研究概况 | 第16-20页 |
| 1.2.1 芸薹生链格孢菌的危害 | 第16-17页 |
| 1.2.2 链格孢属真菌的致病机制 | 第17-20页 |
| 1.2.3 芸薹生链格孢转录因子研究现状 | 第20页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第20页 |
| 2 | 第20-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-25页 |
| 2.1.1 菌株及其培养 | 第20-21页 |
| 2.1.2 酶和主要的试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 引物序列 | 第21-23页 |
| 2.1.4 培养基及溶液配制 | 第23-25页 |
| 2.1.4.1 培养基配制 | 第23-24页 |
| 2.1.4.2 溶液配制 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-41页 |
| 2.2.1 Ab0009基因的克隆和结构分析 | 第25-29页 |
| 2.2.1.1 总RNA的提取（Trizol法） | 第25-26页 |
| 2.2.1.2 反转录cDNA第一条链的合成 | 第26页 |
| 2.2.1.3 基因组DNA的提取（CTAB/Na Cl法） | 第26-27页 |
| 2.2.1.4 Ab0009基因cDNA和DNA序列克隆 | 第27-28页 |
| 2.2.1.5 PCR产物回收及测序 | 第28-29页 |
| 2.2.1.6 基因序列分析 | 第29页 |
| 2.2.2 打靶载体与Ab0009基因缺失突变体的获得及验证 | 第29-39页 |
| 2.2.2.1 打靶片段的获得 | 第29-32页 |
| 2.2.2.2 大肠杆菌的感受态细胞制备与转化 | 第32页 |
| 2.2.2.3 打靶载体的验证 | 第32-33页 |
| 2.2.2.4 质粒DNA提取与浓缩 | 第33-34页 |
| 2.2.2.5 原生质体制备 | 第34-35页 |
| 2.2.2.6 原生质体转化 | 第35页 |
| 2.2.2.7 突变体的筛选和PCR验证 | 第35-36页 |
| 2.2.2.8 突变体的RT-PCR验证 | 第36-37页 |
| 2.2.2.9 突变体的Southern杂交验证 | 第37页 |
| 2.2.2.10 Ab0009敲除突变体的基因互补实验 | 第37-39页 |
| 2.2.3 Ab0009基因敲除突变体表型分析 | 第39-41页 |
| 2.2.3.1 菌落形态观察 | 第39页 |
| 2.2.3.2 生长速度测定 | 第39-40页 |
| 2.2.3.3 孢子菌丝观察 | 第40页 |
| 2.2.3.4 渗透胁迫敏感性测定 | 第40页 |
| 2.2.3.5 氧胁迫敏感性测定 | 第40页 |
| 2.2.3.6 致病性测定 | 第40页 |
| 2.2.3.7 穿透力观察 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-59页 |
| 3.1 Ab0009基因的克隆和结构分析 | 第41-43页 |
| 3.1.1 Ab0009基因的查找 | 第41页 |
| 3.1.2 Ab0009基因的克隆 | 第41页 |
| 3.1.3 Ab0009基因的保守区分析 | 第41-42页 |
| 3.1.4 Ab0009基因的相似性比对 | 第42-43页 |
| 3.2 Ab0009打靶载体与Ab0009基因缺失突变体的获得及验证 | 第43-48页 |
| 3.2.1 Ab0009打靶载体的构建及验证 | 第43-46页 |
| 3.2.1.1 split-marker重组技术构建重组片段 | 第43-46页 |
| 3.2.1.2 打靶载体的验证 | 第46页 |
| 3.2.2 Ab0009基因缺失突变体的获得及验证 | 第46-48页 |
| 3.2.2.1 PCR验证 | 第46-47页 |
| 3.2.2.2 RT-PCR验证 | 第47-48页 |
| 3.2.2.3 Southern杂交验证 | 第48页 |
| 3.3 Ab0009基因缺失打靶载体及缺失突变体的互补体的验证 | 第48-49页 |
| 3.4 Ab0009基因敲除突变体表型分析 | 第49-59页 |
| 3.4.1 菌落形态观察 | 第49-50页 |
| 3.4.2 生长速度测定 | 第50-51页 |
| 3.4.3 菌丝孢子的观察 | 第51-53页 |
| 3.4.4 渗透胁迫敏感性测定 | 第53-54页 |
| 3.4.5 氧胁迫敏感性测定 | 第54-55页 |
| 3.4.6 致病性测定 | 第55-57页 |
| 3.4.7 穿透力观察 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 5 总结 | 第61-62页 |
| 6 参考文献 | 第62-67页 |
| 7 致谢 | 第67-68页 |
| 8 攻读学位期间发表论文情况 | 第68页 |
