| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-29页 |
| 1.1 鸡传染性贫血病毒（CIAV）的研究进展 | 第16-22页 |
| 1.1.1 病原学 | 第16-17页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第17页 |
| 1.1.3 发病机理 | 第17-18页 |
| 1.1.4 病理变化及症状 | 第18-19页 |
| 1.1.5 CIAV的诊断与检测 | 第19-21页 |
| 1.1.5.1 病毒的分离与鉴定 | 第19-20页 |
| 1.1.5.2 分子生物学检测技术 | 第20页 |
| 1.1.5.3 血清学检测技术 | 第20-21页 |
| 1.1.6 CIAV的防治 | 第21页 |
| 1.1.7 研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 1.2 禽腺病毒（FAdV）的研究进展 | 第22-29页 |
| 1.2.1 禽腺病毒分类 | 第22-23页 |
| 1.2.2 生物学特点 | 第23-28页 |
| 1.2.2.1 形态学及理化性质 | 第23-24页 |
| 1.2.2.2 基因组结构 | 第24-25页 |
| 1.2.2.3 主要蛋白及功能 | 第25-26页 |
| 1.2.2.4 流行病学 | 第26-27页 |
| 1.2.2.5 临床症状及病理变化 | 第27-28页 |
| 1.2.2.6 FAdV的诊断及检测 | 第28页 |
| 1.2.3 研究目的与意义 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-44页 |
| 2.1 试验材料 | 第29-30页 |
| 2.1.1 细胞及动物 | 第29页 |
| 2.1.2 毒株及菌种 | 第29页 |
| 2.1.3 疫苗 | 第29页 |
| 2.1.4 主要试剂及其配制 | 第29-30页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第30页 |
| 2.2 CIAV SYBR GreenⅠ法荧光定量PCR检测方法的建立及其应用 | 第30-41页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第30-31页 |
| 2.2.2 DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.3 质粒标准品的制备 | 第32-36页 |
| 2.2.3.1 常规的PCR扩增 | 第32页 |
| 2.2.3.2 PCR产物的纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.3.3 PCR回收产物的连接 | 第33页 |
| 2.2.3.4 DH5α感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.3.5 连接产物的转化 | 第34页 |
| 2.2.3.6 质粒的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.3.7 重组质粒DNA的PCR鉴定 | 第35页 |
| 2.2.3.8 序列测定及分析 | 第35页 |
| 2.2.3.9 标准品浓度计算 | 第35-36页 |
| 2.2.4 反应条件的优化 | 第36页 |
| 2.2.5 标准曲线的建立 | 第36-37页 |
| 2.2.6 敏感性试验 | 第37页 |
| 2.2.7 特异性试验 | 第37-38页 |
| 2.2.7.1 RNA的提取 | 第37页 |
| 2.2.7.2 RT-PCR的扩增 | 第37-38页 |
| 2.2.7.3 荧光定量PCR方法的特异性试验 | 第38页 |
| 2.2.8 重复性试验 | 第38-39页 |
| 2.2.9 荧光定量PCR在检测弱毒疫苗CIAV污染中的应用 | 第39-41页 |
| 2.2.9.1 鸡胚卵黄囊接种 | 第39页 |
| 2.2.9.2 CIAV的EID50测定 | 第39-40页 |
| 2.2.9.3 人工模拟弱毒疫苗CIAV污染及检测 | 第40-41页 |
| 2.2.9.3.1 人工模拟CIAV的污染 | 第40页 |
| 2.2.9.3.2 CIAV的检测 | 第40页 |
| 2.2.9.3.3 CIAV的复检 | 第40-41页 |
| 2.2.9.4 商品化禽弱毒疫苗的检测 | 第41页 |
| 2.3 FAdV PCR检测方法的建立及应用 | 第41-44页 |
| 2.3.1 FAdV PCR方法的建立 | 第41-43页 |
| 2.3.1.1 引物的设计与合成 | 第41页 |
| 2.3.1.2 DNA的提取 | 第41页 |
| 2.3.1.3 PCR的扩增 | 第41-42页 |
| 2.3.1.4 PCR产物的克隆测序 | 第42页 |
| 2.3.1.5 特异性试验 | 第42页 |
| 2.3.1.6 敏感性试验 | 第42-43页 |
| 2.3.2 PCR方法在检测疫苗FAdV污染中的应用 | 第43-44页 |
| 2.3.2.1 商品化弱毒疫苗DNA的提取 | 第43页 |
| 2.3.2.2 PCR扩增及测序 | 第43页 |
| 2.3.2.3 FAdV的分离鉴定 | 第43-44页 |
| 2.3.2.3.1 病毒的扩增 | 第43页 |
| 2.3.2.3.2 鸡胚尿囊液DNA的提取及PCR扩增 | 第43页 |
| 2.3.2.3.3 克隆测序及序列拼接 | 第43-44页 |
| 2.3.2.3.4 hexon基因序列分析 | 第44页 |
| 2.3.2.4 FAdV分离株的致病性研究 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-60页 |
| 3.1 CIAV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法的建立 | 第44-48页 |
| 3.1.1 反应条件的优化 | 第44页 |
| 3.1.2 标准曲线的建立 | 第44-46页 |
| 3.1.3 扩增产物熔解曲线的分析 | 第46页 |
| 3.1.4 SYBR Green荧光定量PCR的敏感性、特异性和可重复性试验 | 第46-48页 |
| 3.1.4.1 SYBR Green荧光定量PCR检测与常规PCR的敏感性比较 | 第46-47页 |
| 3.1.4.2 SYBR Green荧光定量PCR检测的特异性 | 第47-48页 |
| 3.1.4.3 SYBR Green荧光定量PCR检测的可重复性 | 第48页 |
| 3.2 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法在检测弱毒疫苗CIAV污染的应用 | 第48-51页 |
| 3.2.1 人工模拟禽弱毒疫苗CIAV污染的检测 | 第48-50页 |
| 3.2.2 商品化禽弱毒疫苗的检测 | 第50-51页 |
| 3.3 FAdV PCR检测方法的建立 | 第51-53页 |
| 3.3.1 PCR产物的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.2 PCR方法的特异性试验 | 第52-53页 |
| 3.3.3 PCR方法的敏感性试验 | 第53页 |
| 3.4 PCR检测方法在弱毒疫苗FAdV污染的应用 | 第53-60页 |
| 3.4.1 弱毒疫苗的检测 | 第53-54页 |
| 3.4.2 FAdV的分离鉴定 | 第54-55页 |
| 3.4.3 FAdV分离株hexon基因的序列比对分析 | 第55-56页 |
| 3.4.4 FAdV分离株hexon基因的系统进化分析 | 第56-57页 |
| 3.4.5 FAdV分离株的致病性试验 | 第57-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 4.1 CIAV SYBR Green检测方法的建立及其在疫苗污染检测中的应用 | 第60-61页 |
| 4.2 FAdV PCR检测方法的建立及其在疫苗污染检测中的应用 | 第61-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 6 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第73页 |
