| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 引言 | 第9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-13页 |
| 1 IPNV的分子结构及危害 | 第10-12页 |
| 1.1 IPNV的分子结构 | 第10页 |
| 1.2 IPNV的危害 | 第10-11页 |
| 1.3 IPNV的诊断 | 第11页 |
| 1.4 IPNV的预防 | 第11-12页 |
| 1.4.1 药物预防 | 第11页 |
| 1.4.2 疫苗 | 第11-12页 |
| 2 反向遗传操作系统的研究进展 | 第12页 |
| 2.1 双RNA病毒反向遗传操作系统 | 第12页 |
| 2.2 IPNV反向遗传操作系统 | 第12页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第12-13页 |
| 第二章 传染性胰腺坏死病毒ChRtm213株全基因组序列的测定和分析 | 第13-29页 |
| 1 实验材料 | 第14-16页 |
| 1.1 仪器 | 第14页 |
| 1.2 试剂用品 | 第14-15页 |
| 1.3 试剂配方 | 第15-16页 |
| 1.3.1 大肠杆菌培养所用试剂配方 | 第15页 |
| 1.3.2 琼脂糖凝胶电泳所用试剂配方 | 第15页 |
| 1.3.3 氯化钙制备感受态细胞方法 | 第15-16页 |
| 2 材料和方法 | 第16-20页 |
| 2.1 细胞系和病毒株 | 第16页 |
| 2.2 引物设计 | 第16-17页 |
| 2.3 RNA提取 | 第17-18页 |
| 2.4 RT-PCR扩增IPNV全基因组 | 第18页 |
| 2.5 序列的比对和分析 | 第18-20页 |
| 3 结果 | 第20-27页 |
| 3.1 IPNV ChRtm213毒株的基因组 | 第20-22页 |
| 3.2 同源性和系统发育分析 | 第22-27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 IPNV ChRtm213反向遗传操作系统的初步建立 | 第29-41页 |
| 1 实验材料 | 第29-31页 |
| 1.1 病毒、细胞株、质粒 | 第29页 |
| 1.2 仪器 | 第29-30页 |
| 1.3 主要试剂 | 第30页 |
| 1.4 引物设计与合成 | 第30-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-35页 |
| 2.1 全基因组真核表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.1.1 目的基因的获取及T载体的连接 | 第31页 |
| 2.1.2 目的基因的高保真克隆及真核表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.2 测序分析 | 第32页 |
| 2.3 病毒拯救 | 第32-33页 |
| 2.4 拯救病毒RT-PCR鉴定 | 第33页 |
| 2.5 重组病毒的纯化 | 第33-34页 |
| 2.6 电镜观察 | 第34页 |
| 2.7 重组病毒的免疫学检测 | 第34页 |
| 2.8 拯救病毒的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-39页 |
| 3.1 RT-PCR结果以及重组质粒PCR鉴定结果 | 第35-36页 |
| 3.2 重组病毒的拯救及鉴定结果 | 第36-39页 |
| 3.2.1 重组病毒的细胞培养 | 第36页 |
| 3.2.2 病毒的噬斑纯化培养 | 第36-37页 |
| 3.2.3 IFA结果 | 第37页 |
| 3.2.4 电镜观察 | 第37-38页 |
| 3.2.5 酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.6 拯救病毒RT-PCR鉴定 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 4.1 基于T7 RNA聚合酶介导的IPNV拯救系统 | 第39-40页 |
| 4.2 点突变方法引入分子标签 | 第40页 |
| 4.3 基因组的保真性与病毒的拯救 | 第40-41页 |
| 4.4 影响病毒拯救效率的其他因素 | 第41页 |
| 结论 | 第41-42页 |
| 附录 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
