中文摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
前言 | 第9-25页 |
1 先天性心脏病概述 | 第9-22页 |
1.1 先天性心脏病分类 | 第9-10页 |
1.2 常见先天性心脏病简介 | 第10-13页 |
1.3 影响先天性心脏病的因素 | 第13-22页 |
2 RNA干扰技术 | 第22-23页 |
3 GIGYF1基因与细胞凋亡、增殖 | 第23-25页 |
材料与方法 | 第25-37页 |
1 实验材料 | 第25-28页 |
1.1 细胞株 | 第25页 |
1.2 主要试剂 | 第25-26页 |
1.3 主要试剂配制方法 | 第26-27页 |
1.4 主要仪器与设备 | 第27-28页 |
2 实验方法 | 第28-36页 |
2.1 心肌细胞H9C2的培养 | 第28-30页 |
2.2 基因转染 | 第30页 |
2.3 MTT比色法检测转染后的细胞存活率 | 第30-31页 |
2.4 基因GIGYF1的mRNA表达水平检测 | 第31-32页 |
2.5 RT-PCR检测GIGYF1、GATA4、Nkx2.5和Tbx5相对表达量 | 第32-33页 |
2.6 流式细胞仪检测细胞凋亡率 | 第33页 |
2.7 细胞克隆实验 | 第33-34页 |
2.8 Hochest33258染色观察转染后48h H9C2细胞核形态变化 | 第34页 |
2.9 Western blotting检测转染细胞中相关蛋白的表达 | 第34-36页 |
3 统计学分析 | 第36-37页 |
结果 | 第37-50页 |
1 荧光检测GIGYF1基因转染效率 | 第37-38页 |
2 MTT实验结果 | 第38-39页 |
3 Real-time PCR检测GIGYF1基因表达情况 | 第39-41页 |
4 半定量RT-PCR检测GATA4、Nkx2.5和Tbx5表达情况 | 第41-43页 |
5 流式细胞术检测细胞凋亡结果 | 第43-44页 |
6 细胞克隆实验检测细胞增殖能力结果 | 第44-46页 |
7 Hochest33258染色结果 | 第46页 |
8 H9C2细胞转染后蛋白表达 | 第46-50页 |
讨论 | 第50-55页 |
1 基因GIGYF1与H9C2心肌细胞凋亡的关系 | 第51页 |
2 基因GIGYF1与H9C2心肌细胞增殖的关系 | 第51-53页 |
3 基因GIGYF1与H9C2心肌细胞分化的关系 | 第53-55页 |
结论 | 第55-56页 |
参考文献 | 第56-64页 |
附录: 缩略词表 | 第64-65页 |
在读期间的主要科研成果 | 第65-66页 |
致谢 | 第66页 |