| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 中英文对照词 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1 植物MAPK | 第11-16页 |
| 1.1 MAPK级联系统 | 第11-12页 |
| 1.2 MAPK功能 | 第12-15页 |
| 1.2.1 MAPK在生长发育中的功能 | 第12-13页 |
| 1.2.2 MAPK在非生物胁迫应答中的功能 | 第13-14页 |
| 1.2.3 MAPK在生物胁迫应答中的功能 | 第14-15页 |
| 1.3 番茄MAPK | 第15-16页 |
| 2 植物MAPK相互作用蛋白 | 第16-18页 |
| 3 蛋白质相互作用的研究进展 | 第18-24页 |
| 3.1 酵母双杂交的研究进展 | 第19-22页 |
| 3.1.1 酵母双杂交系统的原理 | 第20-21页 |
| 3.1.2 酵母双杂交系统的优点 | 第21页 |
| 3.1.3 酵母双杂交系统的局限性 | 第21-22页 |
| 3.1.4 酵母双杂交系统的应用 | 第22页 |
| 3.2 双分子荧光互补技术(BiFC)的研究进展 | 第22-24页 |
| 3.2.1 双分子荧光互补技术(BiFC)的原理 | 第23页 |
| 3.2.2 双分子荧光互补技术(BiFC)的特点 | 第23-24页 |
| 3.2.3 双分子荧光互补技术(BiFC)的应用 | 第24页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 酵母双杂筛选与SIMPK1互作的蛋白 | 第25-41页 |
| 1 实验材料 | 第25-27页 |
| 1.1 菌种及载体 | 第25-26页 |
| 1.2 酶及相关试剂 | 第26页 |
| 1.3 溶液及培养基配制 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-32页 |
| 2.1 诱饵载体的构建 | 第27-29页 |
| 2.1.1 引物设计 | 第27页 |
| 2.1.2 SlMPK1基因CDS全长序列克隆 | 第27-28页 |
| 2.1.3 目的片段回收 | 第28页 |
| 2.1.4 目的片段连接到T载体 | 第28页 |
| 2.1.5 连接产物转化大肠杆菌感受态 | 第28页 |
| 2.1.6 菌落PCR鉴定及测序 | 第28-29页 |
| 2.1.7 pGBKT7/SlMPK1、pGADT7/SlMPK1质粒的构建 | 第29页 |
| 2.2 诱饵质粒pGBKT7/SlMPK1和猎物空质粒pGADT7/EV共转化酵母Y2HGold菌株 | 第29-30页 |
| 2.3 重组诱饵质粒pGBKT7/SlMPK1自激活作用及毒性检测 | 第30页 |
| 2.4 3-AT抑制自激活浓度优化 | 第30页 |
| 2.5 酵母双杂交文库筛选方法 | 第30-31页 |
| 2.6 阳性菌落AD插入片段PCR扩增及测序分析 | 第31-32页 |
| 3 实验结果 | 第32-40页 |
| 3.1 诱饵质粒及pGADT7/SlMPK1质粒构建及鉴定 | 第32页 |
| 3.2 酵母双杂交诱饵蛋白自激活及毒性检验 | 第32-33页 |
| 3.3 酵母双杂交筛选时3-AT的工作浓度 | 第33-35页 |
| 3.4 cDNA文库筛选互作蛋白 | 第35页 |
| 3.5 测序及同源性分析 | 第35-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 SlMPK1互作蛋白筛选结果的验证 | 第41-53页 |
| 1 实验材料 | 第41-42页 |
| 1.0 植物材料 | 第41页 |
| 1.1 菌种及载体 | 第41页 |
| 1.2 酶及相关试剂 | 第41-42页 |
| 1.3 溶液及培养基配制 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-46页 |
| 2.1 酵母细胞内的相互作用验证 | 第42-44页 |
| 2.1.1 载体构建 | 第42-43页 |
| 2.1.2 pGBKT7/SlMPK1与互作蛋白的相互作用验证 | 第43页 |
| 2.1.3 pGADT7/SlMPK1与互作蛋白的相互作用验证 | 第43-44页 |
| 2.2 双分子荧光互补(BiFC)验证 | 第44-46页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第44页 |
| 2.2.2 农杆菌感受态制备 | 第44-45页 |
| 2.2.3 转化农杆菌 | 第45页 |
| 2.2.4 烟草瞬时表达 | 第45-46页 |
| 2.2.5 烟草原生质体的制备 | 第46页 |
| 3 实验结果 | 第46-52页 |
| 3.1 酵母细胞内的相互作用验证 | 第46-49页 |
| 3.1.1 载体构建及鉴定 | 第46-47页 |
| 3.1.2 pGBKT7/SlMPK1与互作蛋白的验证 | 第47-48页 |
| 3.1.3 pGADT7/SlMPK1与互作蛋白的验证 | 第48-49页 |
| 3.2 BiFC验证 | 第49-52页 |
| 3.2.1 载体构建及鉴定 | 第50页 |
| 3.2.2 烟草的瞬时表达 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 SlMPK1相互作用蛋白的初步功能分析 | 第53-63页 |
| 1 实验材料 | 第53-54页 |
| 1.1 植物材料 | 第53页 |
| 1.2 菌种及载体 | 第53页 |
| 1.3 酶及相关试剂 | 第53-54页 |
| 1.4 溶液及培养基配制 | 第54页 |
| 2 实验方法 | 第54-58页 |
| 2.1 SlMPK1相互作用蛋白的亚细胞定位 | 第54-55页 |
| 2.1.1 载体构建 | 第54-55页 |
| 2.1.2 农杆菌感受态制备 | 第55页 |
| 2.1.3 转化农杆菌 | 第55页 |
| 2.1.4 烟草瞬时表达 | 第55页 |
| 2.1.5 烟草原生质体的制备 | 第55页 |
| 2.2 相关基因的定量PCR分析 | 第55-58页 |
| 2.2.1 材料处理及样品采集 | 第55-56页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第56页 |
| 2.2.3 植物总RNA提取 | 第56-57页 |
| 2.2.4 反转录 | 第57页 |
| 2.2.5 qRT-PCR体系及程序 | 第57-58页 |
| 3 实验结果 | 第58-61页 |
| 3.1 SlMPK1相互作用蛋白的亚细胞定位 | 第58-59页 |
| 3.1.1 载体构建 | 第58页 |
| 3.1.2 亚细胞定位 | 第58-59页 |
| 3.2 互作蛋白的编码基因在番茄不同组织中的表达特征分析 | 第59-60页 |
| 3.3 互作蛋白的编码基因在高温胁迫下的表达分析 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 总结与展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 附录 | 第73-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第80-81页 |
